[发明专利]用于解决基因检测中荧光定量PCR非特异性扩增干扰的方法

权利要求书

1.一种用于解决基因检测中荧光定量PCR非特异性扩增干扰的方法，其特征在于，其PCR扩增反应条件为：90—95℃预变性1—15min；90—95℃变性10—30s；50—65℃退火30s—90s；70—85℃延伸10s—30s；35-50个循环；信号收集设置在延伸环节。

2.如权利要求1所述的用于解决基因检测中荧光定量PCR非特异性扩增干扰的方法，其特征在于，还包括：20μL PCR反应体系；

所述20μL PCR反应体系包括以下组分：2×SYBR Green I PCR Master Mix 10μL，特异性引物对各0.4μL，DNA模板10—100ng，ddH₂O补充至20μL。

3.如权利要求2所述的用于解决基因检测中荧光定量PCR非特异性扩增干扰的方法，其特征在于，所述特异性引物对包括以下7对引物对中任意一对：

引物对1：

上游引物序列如SEQ ID NO.1所示；

下游引物序列如SEQ ID NO.2所示；

引物对2：

上游引物序列如SEQ ID NO.3所示；

下游引物序列如SEQ ID NO.2所示；

引物对3：

上游引物序列如SEQ ID NO.4所示；

下游引物序列如SEQ ID NO.2所示；

引物对4：

上游引物序列如SEQ ID NO.5所示；

下游引物序列如SEQ ID NO.2所示；

引物对5：

上游引物序列如SEQ ID NO.6所示；

下游引物序列如SEQ ID NO.2所示；

引物对6：

上游引物序列如SEQ ID NO.7所示；

下游引物序列如SEQ ID NO.2所示；

引物对7：

上游引物序列如SEQ ID NO.7所示；

下游引物序列如SEQ ID NO.8所示。

4.如权利要求1所述的用于解决基因检测中荧光定量PCR非特异性扩增干扰的方法，其特征在于，在80℃收集荧光信号。

5.如权利要求1所述的用于解决基因检测中荧光定量PCR非特异性扩增干扰的方法，其特征在于，所述基因为人K-Ras基因。

6.如权利要求1-5任一项所述的方法在荧光染料法定量PCR反应实验中的应用。

7.如权利要求1-5任一项所述的方法在荧光染料法定量PCR反应试剂盒中的应用。