[发明专利]一种用于生物标志物检测的试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种用于生物标志物检测的试剂盒及其制备方法和应用。该试剂盒包括独立包装的生物芯片和纳米标签。制备方法如下：所述生物芯片以载玻片为载体，在载玻片上蒸镀有一层铬膜，铬膜上蒸镀有一层金膜，金膜上修饰有待检测生物标志物对应的抗体；所述纳米标签由待检测生物标志物对应的抗体和纳米金颗粒水溶液混合即得。本发明在生物芯片上滴加待检测生物标志物和纳米标签，形成双抗夹心结构；利用金纳米颗粒具有超辐射效应，在暗场下，纳米金颗粒会呈现出一个很亮的点，再通过计算金纳米颗粒数目以得到检测结果，可用于生物标志物的检测便于检测，可视性大幅提高，并显著提高检测灵敏度。

技术领域

本发明涉及生物标志物检测技术领域，尤其涉及一种用于生物标志物检测的试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

生物标志物(Biomarker)是指可以标记系统、器官、组织、细胞及亚细胞结构或功能的改变或可能发生的改变的生化指标，具有非常广泛的用途。生物标志物可用于疾病诊断、判断疾病分期或者用来评价新药或新疗法在目标人群中的安全性及有效性。

现有的生物标志物的检测方法有酶联免疫吸附检测、表面等离子体共振检测、电化学检测、拉曼和荧光检测等方法。但是这些检测手段存在灵敏度低、需标记、费用高(需光谱仪)的缺点。亟需一种检测简单、仪器要求门槛低，且保证灵敏度的高效检测试剂盒及检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于生物标志物检测的试剂盒及其制备方法和应用，该试剂盒检测灵敏度高、无须标记、仪器配置简单。

本发明提供以下技术方案：

本发明的目的之一在于提供用于生物标志物检测的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备生物芯片：

以载玻片为载体，在载玻片上依次镀铬膜和金膜，再在金膜上修饰待检测生物标志物对应的抗体；

(2)制备纳米标签：

将待检测生物标志物对应的抗体和纳米金颗粒水溶液混合即得。优选的，将待检测生物标志物对应的抗体和纳米金颗粒水溶液混匀后，静置0.8～1.2h，得到纳米标签。

进一步，所述步骤(1)中镀膜的方法为蒸镀，蒸镀的蒸发速率独立为0.04～0.06nm/s，优选为0.05nm/s；蒸镀时间独立为90～110s，100s；优选为蒸镀温度独立为20～30℃；优选为25℃。

进一步，所述步骤(1)中铬膜的厚度为4～6nm。优选为5nm。

进一步，所述步骤(1)中金膜的厚度为45～55nm。优选为50nm。

进一步，所述生物标志物包括免疫球蛋白。优选为人免疫球蛋白。生物标志物对应的抗体相对应的为免疫球蛋白抗体，优选为羊抗人免疫球蛋白。

进一步，所述步骤(1)中在金膜上修饰待检测生物标志物对应的抗体的方法为：在金膜表面滴加16-巯基十六烷基酸，静置0.8～1.2h后，用去离子水冲洗，然后滴加抗体，静置0.8～1.2h。优选的，16-巯基十六烷基酸的滴加量优选为30μL/cm²，静置时间均为1h，冲洗次数为3次，抗体滴加量为20μL/cm²，抗体的浓度优选为1mg/mL。

进一步，所述步骤(2)中纳米金颗粒水溶液中纳米金颗粒的浓度为0.02～0.04nM；所述纳米金颗粒的粒径为50～70nm。所述待检测生物标志物对应的抗体和纳米金颗粒水溶液的体积比优选为1:50；所述纳米金颗粒水溶液的溶剂优选为去离子水；所述去离子水的电阻率优选为18.3MΩ·cm^-1；所述纳米金颗粒水溶液中纳米金颗粒的浓度优选为0.02～0.04nM，更优选为0.03nM；所述纳米金颗粒的粒径优选为50～70nm，更优选为60nm；所述静置的时间优选为1h。