[发明专利]微流控芯片快速检测菊花B病毒的方法及所用引物

权利要求书

1.微流控芯片快速检测菊花B病毒所用的引物组合，其特征是：包括引物F3-29、B3-29、FIP-29、BIP-29；

引物F3-29：GGAGCGATCATTGCTGATGA，

引物B3-29：TGCCACCACTTGGTCTGA；

引物FIP-29：TAGTTCCATGCCACCGCTGCTATCACTGAACACAGCACGC；

引物BIP-29：GACTGGTCCGCTATGGGTTTCCTTGCAGCCCCATTCTCGA。

2.根据权利要求1所述的微流控芯片快速检测菊花B病毒所用引物组合，其特征是还包括环引物LB29；

环引物LB29：CCCGAATGTCAAGTATGCTGCCTTT。

3.利用如权利要求1或2所述的引物组合进行的微流控芯片快速检测菊花B病毒的方法，其特征是包括如下步骤：

1)、包埋扩增引物：

引物F3-29(100μmol·L^-1)和引物B3-29(100μmol·L^-1)各1μL，FIP-29(100μmol·L^-1)和引物BIP-29(100μmol·L^-1)各8μL，环引物LB29(100μmol·L^-1)4μL，0.5％海藻糖26μL，ddH₂O补足总体积至150μL形成引物混合液，每个微流控芯片检测孔加入1.5μL所述引物混合液，置于恒温加热台65℃加热10min；

2)、加样：

50μL的样品混合液由荧光等温扩增预混液20μL、待测样品cDNA 5μL、ddH₂O补足总体积至50μL组成；

吸取50μL的样品混合液加入至一个微流控芯片加样孔，设置ddH₂O作为阴性对照；

3)、恒温扩增：

将微流控芯片进行恒温扩增，然后根据Ct值进行判断。

4.根据权利要求3所述的微流控芯片快速检测菊花B病毒的方法，其特征是所述步骤3)为：

将微流控芯片置于SC-MA2000微流控芯片检测仪中进行恒温扩增，温度为63.5℃，反应时间为60min；

当Ct30，且有明显扩增曲线时，同时阴性对照未检出，判定待测样品中含有菊花B病毒；

当Ct≥30或显示未检出时，判定待测样品中不含有菊花B病毒。

5.根据权利要求3或4所述的微流控芯片快速检测菊花B病毒的方法，其特征是：每个微流控芯片加样孔对应4个微流控芯片检测孔。