[发明专利]微流控芯片快速检测菊花B病毒的方法及所用引物

说明书

本发明公开了一种微流控芯片快速检测菊花B病毒所用的引物组合，包括引物F3‑29、B3‑29、FIP‑29、BIP‑29。本发明还同时公开了利用上述引物组合进行的微流控芯片快速检测菊花B病毒的方法，包括如下步骤：包埋扩增引物；加样；将微流控芯片进行恒温扩增，然后根据Ct值进行判断。本发明是一种基于CVB的微流控芯片快速检测法，依据实时荧光信号的出现时间、强度和位置，可在30分钟内快速、高效检测CVB，为菊花病毒病害的监测防控提供技术支持，具有灵敏度高、特异性好的优势。

技术领域

本发明涉及一种微流控芯片快速检测菊花B病毒的方法。

背景技术

菊花(Dendranthema morifolium(Ramat.)Tzvel.)为菊科菊属，多年生宿根草本植物，起源于中国，在中国已有3000多年的栽培历史，是我国的传统名花之一，也是世界四大切花之一，具有重要的经济价值，在全世界都广泛栽培。

菊花种苗的繁育主要靠扦插、分株等方式进行，多年的无性繁殖，易造成病毒感染和积累，严重影响了其产量和品质。迄今为止，全球已经报道了超过20种病毒和类病毒病原体感染了菊花。在菊花生产中，病毒和类病毒通常导致10％–30％的产量损失。目前侵染我国菊花的病毒和类病毒共有7种，分别是菊花B病毒(Chrysanthemum virus B，CVB)、番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus，TAV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)、番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus，TSWV)、马铃薯X病毒(Potato virus X，PVX)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y，PVY)，菊花褪绿斑驳类病毒(Chrysanthemum chlorotic mottle viroid，CChMVd)和菊花矮化类病毒(Chrysanthemum stunt viroid，CSVd)。其中CVB是侵染菊花的主要病毒，在世界菊花种植区广泛分布。传统的生物学鉴定只能为植物病毒病提供一些初步的信息和诊断。分子生物学检测技术以其灵敏高效的特点已成为实验室常用的方法，但检测时间较长。血清学检测技术应用最为广泛，但检测结果可能会存在假阳性，同时对于复合侵染的病毒病，ELISA检测方法灵敏度会受到一定影响。电子显微镜可以观察植物病毒内部的细胞学变化，但需要与血清学或者分子生物学检测技术结合才能更好地对病毒进行准确的鉴定，同时植物病毒电镜检测直观简便，但仪器昂贵，对操作人员技术要求较高。现有的检测植物病毒的传统方法一般是RT-PCR，该方法的缺点是耗时时间长，一般需要2小时左右。

微流控芯片技术是近年来迅速发展的新的植物病毒检测技术，可以在30分钟内快速准确的检测植物病毒，具有较高的特异性和灵敏度，仅需SC-MA2000微流控芯片检测仪和恒温加热台设备即可完成检测，不需要其他昂贵的设备。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种微流控芯片快速检测菊花B病毒的方法，本发明根据实时荧光信号的出现时间、强度和位置，可在30分钟内快速、高效检测CVB，为菊花病毒病害的监测防控提供技术支持。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种微流控芯片快速检测菊花B病毒所用引物组合(CVB-29)：包括引物F3-29、B3-29、FIP-29、BIP-29；

引物F3-29：GGAGCGATCATTGCTGATGA，

引物B3-29：TGCCACCACTTGGTCTGA；

引物FIP-29：TAGTTCCATGCCACCGCTGCTATCACTGAACACAGCACGC；

引物BIP-29：GACTGGTCCGCTATGGGTTTCCTTGCAGCCCCATTCTCGA。

作为本发明的微流控芯片快速检测菊花B病毒所用引物组合的改进，还包括环引物LB29；