[发明专利]一种检测新型冠状病毒及流感病毒的试剂盒

权利要求书

1.一种检测新型冠状病毒及流感病毒的试剂盒，其特征在于：包括特异性引物探针组合物、检测反应液A、检测反应液B、阴性质控品和阳性质控品；

所述特异性引物探针组合物由人类基因GAPDH特异性正反向引物、目标病原特异性正反向引物和不同荧光标记的特异性探针组成；

所述目标病原特异性正反向引物包括新型冠状病毒特异性正反向引物、甲型流感病毒特异性正反向引物和乙型流感病毒特异性正反向引物；

所述特异性探针包括GAPDH特异性探针、新型冠状病毒特异性探针、甲型流感病毒特异性探针和乙型流感病毒特异性探针；

所述人类基因GAPDH特异性正反向引物的序列分别为5’-GAGTGCTACATGGTGAGCCCCAAAGCTGGTG-3’和5’-GTGATGGGATTTCCATTGATGACAAGCTTCC-3’，所述GAPDH特异性探针的序列为5’-CACGTATTCCCCCAGGTTTACATGTTCCAA-Cy5-dT-THF-BHQ1dT-GATTCCACCCATGG-3’；

所述新型冠状病毒特异性正反向引物的序列分别为5’-AGGTTATGGCTGTAGTTGTGATCAACTCCG-3’和5’-AGTACTAGTGCCTGTGCCGCACGGTGTAAG-3’，相对应的所述新型冠状病毒特异性探针序列为5’-GAACCCATGCTTCAGTCAGCTGATGCACAA-FAM-dT-CG-THF-TA-BHQ1-dT-TAAACGGGTTTG-3’，所述新型冠状病毒特异性探针含有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1，进而可特异性地检测新型冠状病毒；

甲型流感病毒特异性正反向引物的序列分别为5’-TTAGGATTTGTGTTCACGCTCACCGTGCCC-3’和5’-GTCCATGTTGTTTGGGTCYCCATTCCCATT-3’，相对应的所述甲型流感病毒特异性探针序列为5’-CCAGTGAGCGAGGACTGCAGCGTAGACGC-HEX-dT-THF-BHQ1-dT-GTCCAAAATGCCCTT-3’，进而可特异性地检测甲型流感病毒；

所述乙型流感病毒特异性正反向引物的序列为5’-AACTCACTCTTCGAGCGTCTTAATGAAGGAC-3’和5’-GTCTCCCTCTTCTGGTGATAATCGGTGCTC-3’，相对应的所述乙型流感病毒特异性探针序列为5’-CAATTCGAGCAGCTGAAACTGCGGTGGGAG-TexasRed-dT-THF-BHQ1-dT-TATCCCAATTTGGTC-3’，进而可特异性地检测乙型流感病毒；

所述新型冠状病毒特异性探针序列、甲型流感病毒特异性探针序列和乙型流感病毒特异性探针序列的3’端分别修饰C3-Spacer。

2.如权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒及流感病毒的试剂盒，其特征在于：所用dT-荧光基团标记采用FAM、VIC、TAMRA、NED、JOE、HEX、Yakima Yellow、Texas Red、Cy5、Cy3中任一种荧光基团标记；dT-淬灭剂基团采用BHQ1、BHQ2、Eclipse中任一种荧光淬灭基团标记。

3.如权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒及流感病毒的试剂盒，其特征在于：所述特异性引物探针组合物中特异性正反引物浓度为6-25μmol/L，探针浓度为2～10μmol/L。

4.如权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒及流感病毒的试剂盒，其特征在于：所述检测反应液A由逆转录酶、重组酶、SSB、聚合酶、dNTPs组成，其每份反应中重组酶的用量为1～5U；逆转录酶用量为2～4U；SSB单链结合蛋白用量为0.1～0.5ng；聚合酶用量为1～5U；dNTPs为0.25～0.45mmol。

5.如权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒及流感病毒的试剂盒，其特征在于：所述检测反应液B由Tris-HAc、Mg(Ac)₂组成，Tris-HAc的pH值为7.8～8.8；Tris-HAc浓度为20～100mmol/L；Mg(Ac)₂浓度为2～8mmol/L。

6.如权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒及流感病毒的试剂盒，其特征在于：所述阴性质控品为生理盐水，所述阳性质控品为含有新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒三个靶基因扩增区域基因片段连接后而构建的人工构建假病毒。