[发明专利]Cry1A类毒素广谱检测用单链抗体及基因序列与应用

权利要求书

1.Cry1A类毒素广谱检测用单链抗体，其特征在于，该检测用单链抗体为scFv-5B5或其突变体scFv-2G12，所述单链抗体scFv-5B5的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述单链抗体scFv-2G12的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.如权利要求1所述单链抗体scFv-5B5或scFv-2G12的基因序列。

3.根据权利要求2所述的基因序列，其特征在于，编码所述单链抗体scFv-5B5的基因序列如SEQ ID NO.1所示，编码所述单链抗体scFv-2G12的基因序列如SEQ ID.3所示。

4.如权利要求1所述单链抗体在Cry1A类毒素检测中的应用，所述Cry1A类毒素为Cry1Aa、Cry1Ab和Cry1Ac。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，具体检测方法如下：

步骤1、包被捕获抗体—将Cry1A类毒素单链抗体scFv-5B5或scFv-2G12采用PBS缓冲液稀释到3.5μg/mL后，加入到96孔酶标板中，100 μL/孔，于4 ℃条件下包被过夜；

步骤2、封闭—包被过夜之后，将孔内液体甩出，采用PBST溶液洗涤，随后向孔中加入质量浓度为3%的 MPBS作为封闭液，250μL/孔，然后将酶标板置于37 ℃培养箱中孵育2 h；

步骤3、加样品—将酶标板采用PBST溶液洗涤之后，将预先溶解在PBS缓冲液中的Cry1A类毒素样品加入到孔内，100 μL/孔，然后将酶标板置于37 ℃培养箱中孵育1 h；

步骤4、加检测抗体—将酶标板采用PBST溶液洗涤之后，向孔内加入浓度为0.2 μg/mL的抗Cry1类毒素多克隆抗体，100 μL/孔，随后将酶标板置于37℃培养箱中孵育1 h；

步骤5、加酶标抗体—将酶标板采用PBST溶液洗涤之后，向孔内加入HRP标记的羊抗兔抗体，100 μL/孔，将酶标板置于37℃培养箱中孵育1 h；

步骤6、显色—将酶标板采用PBST溶液洗涤之后，将TMB显色液体系加入到酶标板微孔内，100μL/孔，并将酶标板置于37 ℃培养箱中避光孵育15 min；

步骤7、检测—将终止液加入到酶标板的微孔内，50μL/孔，在酶标仪上于450 nm条件下测吸光度值。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述Cry1A类毒素样品为Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac中的至少一种。