[发明专利]Cry1A类毒素广谱检测用单链抗体及基因序列与应用

说明书

本发明提出了Cry1A类毒素广谱检测用单链抗体及基因序列和应用，该单链抗体为scFv‑5B5或其突变体scFv‑2G12，单链抗体scFv‑5B5的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，单链抗体scFv‑2G12的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明提供的两种单链抗体与3种Cry1A类毒素（Cry1Aa，Cry1Ab和Cry1Ac）均具有较好的结合活性，同时与Cry1B、Cry1C和Cry1F毒素无交叉反应，可用于Cry1A类毒素的广谱检测，操作简便，宜于推广应用。

技术领域

本发明涉及Cry1A类毒素广谱检测用单链抗体及其基因序列与应用，具体涉及一种来源于抗Cry1A类毒素单克隆细胞5B5基因的单链抗体scFv-5B5及其基因序列和应用，以及在scFv-5B5基础上突变改造后的单链抗体scFv-2G12及其基因序列和应用，属于基因工程抗体和免疫学检测技术领域。

背景技术

Bt Cry毒素是由苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)在其孢子形成阶段产生的，它是一种杀虫蛋白，对鳞翅目和鞘翅目昆虫幼虫有效。当它被敏感昆虫幼虫摄取后，在碱性环境及中肠蛋白酶的作用下裂解为65kDa大小的活性蛋白，并与存在于肠道细胞中的特定受体结合，导致孔隙的形成和中肠上皮细胞的裂解，最终导致幼虫死亡。另一方面，因为哺乳动物体内缺乏Bt Cry毒素蛋白的受体，所以Bt Cry毒素被认为对人类和家畜是安全的。目前，Bt Cry1A类毒素基因被广泛引入转基因作物中,一些包含Bt Cry1A类毒素基因的转基因作物，如水稻、棉花、大豆和玉米等的种植面积在全球范围内逐年增加。转Bt Cry1A类毒素基因抗虫作物的不断出现并得到大面积的推广种植在产生经济和社会效益的同时，其对生态安全的风险以及对人类和其它哺乳类动物的安全隐患也逐渐受到关注。目前，被应用的Bt Cry1A类毒素基因种类愈来愈多，带来的政府安全监管和食品加工企业原料管控的技术制约愈来愈明显，尤其是当针对一些转基因食物中基因检测不能取得满意效果的时候，对毒素表达产物安全筛查检测就显的尤为迫切。

针对转基因产品中毒素蛋白的检测方法，目前主要采用针对单一毒素的抗体检测技术，由于针对不同毒素需要制备相对应的抗体，且抗体制备过程冗长、成本高，不能满足广谱筛查检测的要求。因此开发Bt Cry1A类毒素广谱筛查免疫检测技术是一项很有应用价值的工作。

目前针对转基因产品中毒素蛋白的检测方法主要是集中在核酸和蛋白质分析。基于DNA-PCR的方法已被广泛应用于Bt基因的检测，它具有高度的敏感性。然而，PCR方法需要由经验丰富的人员操作特定的仪器，不仅耗时且不适用于现场快速检测。另一方面，基于蛋白质的检测方法，酶联免疫吸附测定试验(ELISA)克服了前者的缺点，具有特异性强、灵敏度高、样品前处理简单、成本低、适用于现场批量检测等优点，已应用于食品、医疗等多个领域。在ELISA过程中，抗体的特异性、灵敏度等将直接影响检测结果，所以要建立针对BtCry1A类毒素的免疫学检测技术，必须先制备出高质量的抗Bt Cry1A类毒素蛋白的广谱型抗体。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术的不足而提供Cry1A类毒素广谱检测用单链抗体及其基因序列与应用。

本发明提供了Cry1A类毒素广谱检测用单链抗体，该检测用单链抗体为scFv-5B5或其突变体scFv-2G12，所述单链抗体scFv-5B5的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述单链抗体scFv-2G12的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明还提供了单链抗体scFv-5B5或scFv-2G12的基因序列。

编码所述单链抗体scFv-5B5的基因序列如SEQ ID NO.1所示；编码所述单链抗体scFv-2G12的基因序列如SEQ ID.3所示。