[发明专利]一种用于布鲁氏菌RPA扩增的引物组、可视化检测试剂盒及应用

权利要求书

1.一种用于布鲁氏菌RPA扩增的引物组；所述引物组包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种包括权利要求1所述引物组的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括醋酸镁溶液、RPA反应缓冲液、RPABasic冻干粉、50×SYBR GreenI和无菌水。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品；所述阳性对照品包括布鲁氏菌的基因组DNA；所述阴性对照品包括无菌水。

5.权利要求1所述引物组或者权利要求2～4任意一项所述试剂盒在非诊断目的的布鲁氏菌RPA扩增中的应用，所述应用包括以下步骤：

1)提取待检测样品的基因组DNA；

2)以待检测样品的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述引物组进行RPA扩增反应，得到RPA扩增产物；

3)将所述RPA扩增产物和50×SYBR Green I混合，离心，用395nm波长的紫外灯照射，观察反应体系扩增产物产生荧光情况，若反应体系扩增产物呈现荧光，则样品中含有布鲁氏菌，若反应体系扩增产物不呈现荧光，则样品中不含布鲁氏菌。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤2)中还包括分别以布鲁氏菌的基因组DNA和无菌水为模板进行RPA扩增；所述以布鲁氏菌的基因组DNA为模板的RPA扩增结果作为阳性对照，以无菌水为模板的RPA扩增结果作为阴性对照。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤2)中所述RPA扩增反应的反应体系以50μL计包括：2μL模板、12.4μL无菌水、29.5μL RPA反应缓冲液、上下游引物各1.8μL，2.5μL醋酸镁水溶液和4mg RPABasic冻干粉；

所述醋酸镁溶液中醋酸镁的浓度为280mM；所述上游引物和下游引物的浓度分别为10μM；所述模板的浓度为0.1μg/μL。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤2)中所述RPA扩增反应的程序为：37～42℃扩增10～20min。

9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，以RPA扩增的扩增体系总体积为50μL计，步骤3)中所述50×SYBR Green I的用量为1～2μL。