[发明专利]检测冠状病毒并分型的组合物、试剂盒、方法及其用途

权利要求书

1.一种能够检测冠状病毒并分型的组合物，所述组合物包括：

用于荧光探针法的第一组：

如SEQ ID NO:1所示的新型冠状病毒2019-nCoV上游引物、如SEQ ID NO:2所示的新型冠状病毒2019-nCoV下游引物，和如SEQ ID NO:3所示的新型冠状病毒2019-nCoV探针；

如SEQ ID NO:4所示的冠状病毒NL63上游引物、如SEQ ID NO:5所示的冠状病毒NL63下游引物，和如SEQ ID NO:6所示的冠状病毒NL63探针；和

如SEQ ID NO:7所示的冠状病毒HKU1上游引物、如SEQ ID NO:8所示的冠状病毒HKU1下游引物，和如SEQ ID NO:9所示的冠状病毒HKU1探针；以及

用于熔解曲线法的第二组：

如SEQ ID NO:10所示的冠状病毒229E上游引物和如SEQ ID NO:11所示的冠状病毒229E下游引物；

如SEQ ID NO:12所示的冠状病毒OC43上游引物和如SEQ ID NO:13所示的冠状病毒OC43下游引物；

如SEQ ID NO:14所示的冠状病毒MERSr-CoV上游引物和如SEQ ID NO:15所示的冠状病毒MERSr-CoV下游引物；和

如SEQ ID NO:16所示的冠状病毒SARSr-CoV上游引物和如SEQ ID NO:17所示的冠状病毒SARSr-CoV下游引物；

其中，第一组内的荧光报告基团彼此互不相同，并且第二组内的荧光报告基团彼此互不相同。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物进一步包括如SEQ ID NO:18所示的内标上游引物、如SEQ ID NO:19所示的内标下游引物，和如SEQ ID NO:20所示的内标探针。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中，SEQ ID NO:3所示的新型冠状病毒2019-nCoV探针的荧光报告基团为FAM；如SEQ ID NO: 6所示的冠状病毒NL63探针的荧光报告基团为HEX；如SEQ ID NO:9所示的冠状病毒HKU1探针的荧光报告基团为ROX。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中，如SEQ ID NO:10所示的冠状病毒229E上游引物的荧光报告基团为FAM；如SEQ ID NO:12所示的冠状病毒OC43上游引物的荧光报告基团为HEX；如SEQ ID NO:14所示的冠状病毒MERSr-CoV上游引物的荧光报告基团为ROX；如SEQ IDNO:16所示的冠状病毒SARSr-CoV的荧光报告基团为CY5。

5.权利要求1~4中任一项所述的组合物在制备检测冠状病毒并分型的试剂盒中的用途。

6.一种用于检测冠状病毒并分型的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1~4中任一项所述的组合物。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括核酸释放试剂、dNTP、逆转录酶、DNA聚合酶、PCR缓冲液中的至少一种。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，所述组合物中引物的用量为50~150nM；所述组合物中探针的用量为25~75nM。

9.一种用于非诊断目的的检测冠状病毒并分型的方法，所述方法包括以下步骤：

1）释放待测样本的核酸；

2）使用如权利要求1~4中任一项所述的组合物对步骤1）获得的核酸进行荧光定量PCR；

3）获得并分析结果。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述荧光定量PCR的反应条件为：

逆转录，温度为50℃，时间25~35分钟，1次循环；预变性，温度为94℃，时间2~10分钟，1次循环；变性，温度为94℃，时间为10~20秒，退火，温度为60℃，时间为20~40秒，45~50次循环；熔解曲线分析，温度为50℃~95℃，每上升0.5℃采集一次荧光，1次循环。