[发明专利]检测冠状病毒并分型的组合物、试剂盒、方法及其用途

说明书

本发明涉及分子生物学检测领域，更具体的，涉及冠状病毒的检测领域，本发明提供了一种组合物，其能够检测新型冠状病毒2019‑nCoV、冠状病毒229E、冠状病毒NL63、冠状病毒OC43、冠状病毒HKU1、冠状病毒MERSr‑CoV、冠状病毒SARSr‑CoV并分型；与此同时，还提供了包含所述组合物的试剂盒，所述组合物的用途，以及用于检测冠状病毒并分型的方法。本发明的组合物结合荧光探针法和熔解曲线法，能够在一管同时检测七个冠状病毒并进行分型，其成本低，通量高，耗时少，极大的提升了检测效率，并且操作简便，单管操作避免由于样本间交叉引起的假阳性和环境污染。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，更具体地，属于冠状病毒的检测领域，更具体地，本发明能够检测新型冠状病毒2019-nCoV、冠状病毒229E、冠状病毒NL63、冠状病毒OC43、冠状病毒HKU1、冠状病毒MERSr-CoV、冠状病毒SARSr-CoV并分型。

背景技术

冠状病毒为不分节段的单股正链RNA病毒，属于巢病毒目（Nidovirales）冠状病毒科（Coronaviridae）正冠状病毒亚科（Orthocoronavirinae），根据血清型和基因组特点冠状病毒亚科被分为α、β、γ和δ四个属，可以感染许多动物物种，包括人、蝙蝠、狗、猪、老鼠、鸟、牛、鲸、马、山羊、猴子等。已知感染人的冠状病毒有6种，包括α属的229E和NL63，β属的OC43和HKU1、中东呼吸综合征相关冠状病毒（MERSr-CoV）和严重急性呼吸综合征相关冠状病毒（SARSr-CoV）。2019年12月以来，湖北省武汉市发生不明原因肺炎感染事件，从患者下呼吸道分离出一种属于β属的新型冠状病毒。随后，世界卫生组织将其命名为“2019新型冠状病毒（2019-nCoV）”。

新型冠状病毒属于β属的新型冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。其基因特征与SARSr-CoV和MERSr-CoV有明显区别。根据武汉病毒所石正丽研究员最新研究成果发现，2019-nCoV与其实验室之前从中华菊头蝠中分离到的一个蝙蝠冠状病毒毒株RaTG13相似度非常高，整体基因组相似度达96.2%。另外，研究显示2019-nCoV与蝙蝠SARS样冠状病毒（bat-SL-CoVZC45和bat-SL-CoVZXC21）同源性也达85%以上。

在可以感染人的7种冠状病毒中，冠状病毒229E、冠状病毒NL63、冠状病毒OC43、冠状病毒HKU1为常见的呼吸道感染病毒，感染人后病症较轻，一般不会引起重症，但如果是新型冠状病毒2019-nCoV、冠状病毒MERSr-CoV、冠状病毒SARSr-CoV感染，则患者感染症状就非常严重，且极易产生重症。如果能够在一次测试中就对各种冠状病毒进行明确的分型，将会极大方便后续的诊疗措施，做到精准治疗和防控，尤其针对传染性和危害性大的新型冠状病毒2019-nCoV、冠状病毒MERSr-CoV、冠状病毒SARSr-CoV，可以做到及时控制传染源，阻断病毒大流行和大爆发。

因此，本领域需求同时并快速鉴定多个冠状病毒并分型的相关产品。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种能够检测冠状病毒并分型的组合物，所述组合物包括：

第一组：

如SEQ ID NO:1所示的新型冠状病毒2019-nCoV上游引物、如SEQ ID NO:2所示的新型冠状病毒2019-nCoV下游引物，和如SEQ ID NO:3所示的新型冠状病毒2019-nCoV探针；

如SEQ ID NO:4所示的冠状病毒NL63上游引物、如SEQ ID NO:5所示的冠状病毒NL63下游引物，和如SEQ ID NO:6所示的冠状病毒NL63探针；

如SEQ ID NO:7所示的冠状病毒HKU1上游引物、如SEQ ID NO:8所示的冠状病毒HKU1下游引物，和如SEQ ID NO:9所示的冠状病毒HKU1探针；

第二组：