[发明专利]一种水源水中多种游离氨基酸同时检测的固相萃取-液相检测方法

说明书

本发明提供一种水源中多种游离氨基酸同时检测的固相萃取‑液相检测方法。包括如下步骤：采集水样，对水样进行预处理；对预处理后的水样经过固相萃取技术进行富集和提纯，得到样品A；对样品A进行衍生化处理，得到样品B；对样品B进行液液萃取，得到最终样品C；将样品C经过高效液相色谱进行分析，最终检测出水样中游离氨基酸的浓度；制备游离氨基酸的标准溶液，经过高效液相色谱的分析，最终检测出标准溶液中游离氨基酸的浓度，用于样品C检测出游离氨基酸浓度的验证。本发明将除杂柱与吸附柱联用完成氨基酸的纯化及富集过程，柱前衍生将其转化为有紫外吸收或者荧光特性的衍生物与高效液相色谱联用和同时测定水源中13种游离氨基酸。

技术领域

本发明涉及水质检测领域，具体涉及一种水源中多种游离氨基酸同时检测的固相萃取-液相检测方法。

技术背景

氨基酸是生物体内必不可少的一类物质，是合成蛋白质与遗传物质的基本单位，也是水中天然有机物的组成部分，几乎可以在所有类型的天然水体中检出，包括地表水与饮用水。地表水体中的氨基酸主要来源于藻类的代谢以及污、废水排放。水源水中的氨基酸浓度水平一般为20～1000μg/L，占水体可溶性有机碳(DOC)的2～13％，也是水体中可溶性有机氮(DON)的重要组成部分。

氨基酸是水中天然有机物的主要组成部分，也是饮用水中的消毒副产物，尤其是含氮消毒副产物的主要前体物。因此，对水源水中的氨基酸种类及含量的准确测定，对于饮用水消毒副产物的识别与控制等具有重要意义。

目前常见测定氨基酸的方法有高效阳离子交换色谱-柱后茚三酮衍生分光光度法，这是最早测定氨基酸的方法，利用酸性条件下，氨基酸变成阳离子形式，在离子交换柱的作用下分离，用茚三酮发生显色反应，最后用紫外检测器检测，这种方法适用于大多数氨基酸测定，但灵敏度低、检测限高且不稳定；气相色谱法是以气体作为流动相，将氨基酸衍生为易挥发但又不容易发生分解的衍生物，柱效高，分离时间短，易与质谱仪连用，但与羟基、吲哚基反应不彻底；毛细管电泳法是利用石英毛细管在电场的作用下，利用不同样品迁移速度的不同而达到分离的目的，微量、灵敏、柱效高，无须梯度洗脱，可用于氨基酸手性分离的分析；阴离子交换色谱-积分脉冲安培法主要是利用氨基酸转化为阴离子，被金属电极所氧化，检测产生的电流,对氨基酸进行定量，可不发生柱前衍生反应直接测定，但电极难以清理，难以重复利用。

发明内容

水源及饮用水系统中氨基酸含量低，且干扰因素多，需采用适当的预处理方法进行富集及提纯，本发明采用固相萃取技术预处理，目的在于解决上述技术问题，将除杂柱与吸附柱联用完成氨基酸的纯化及富集过程，柱前衍生将其转化为有紫外吸收或者荧光特性的衍生物与高效液相色谱联用和同时测定水源中13种游离氨基酸，提供一种水源中多种游离氨基酸同时检测的固相萃取-液相检测方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种水源水中多种游离氨基酸同时检测的固相萃取-液相检测方法，包括如下步骤：

S1、采集水样，对水样进行预处理；

S2、对步骤S1中预处理后的水样经过固相萃取进行富集和提纯，得到样品A；

S3、对步骤S2中得到的样品A进行柱前衍生处理，得到样品B；

S4、对步骤S3中得到的样品B进行液液萃取，得到最终样品C；

S5、将步骤S4中得到的样品C经过高效液相色谱进行分析，所述高效液相色谱的液相色谱分离流动相由0.1mmol/L乙酸铵和乙腈组成，最终检测出水样中游离氨基酸的浓度；

S6、制备游离氨基酸的标准溶液，经过所述高效液相色谱的分析，最终检测出标准溶液中游离氨基酸的浓度，用于步骤S5中检测出游离氨基酸浓度的验证。

作为优选的，所述步骤S1中的预处理包括如下步骤：水样经过 0.45μm玻璃纤维膜进行过滤，并用盐酸将pH调至1.3，得到预处理后的水样。