[发明专利]一种新型冠状病毒RT-PCR检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括引物对集和探针组；

其中，所述引物对集包括第一引物对和内标引物对，

所述第一引物对包括：

如SEQ ID NO.1所示的正向引物和如SEQ ID NO.2所示的反向引物，

所述内标引物对包括：

如SEQ ID NO.4所示的正向引物和如SEQ ID NO.5所示的反向引物；

所述探针组包括：

核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的第一探针和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的内控探针；

并且，所述第一探针的5’端包含有荧光报告基团，所述第一探针的3’端包含有荧光淬灭基团；所述内控探针的5’端包含有荧光报告基团，所述内控探针的3’端包含有荧光淬灭基团；所述第一探针的5’端荧光报告基团和所述内控探针的5’端荧光报告基团不同。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一容器，所述第一容器内包含引物探针混合液，所述引物探针混合液中包含所述引物对集和所述探针组。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第二容器，所述第二容器内包含RT-PCR反应酶系，所述RT-PCR反应酶系包括热启动Taq酶和逆转录酶。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述第二容器内还包含dNTPs。

5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第三容器，所述第三容器内包含RT-PCR反应液，所述RT-PCR反应液包括Tris-HCl缓冲液、Mg²⁺和Tween-20。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第四容器，所述第四容器内包含DEPC H₂O。

7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一探针的5’端荧光报告基团为FAM，所述第一探针的3’端荧光猝灭基团为BHQ1；所述内控探针的5’端荧光报告基团为VIC，所述内控探针的3’端荧光猝灭基团为BHQ1。

8.一种非诊断目的的多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的方法，所述方法包括步骤：

（1）提供待检测对象的核酸样本；

（2）制备RT-PCR反应体系并进行RT-PCR检测：

其中，所述RT-PCR反应体系包括：步骤（1）提供的所述核酸样本、引物对集和探针组；

所述引物对集包括第一引物对和内标引物对，

所述第一引物对包括：

如SEQ ID NO.1所示的正向引物和如SEQ ID NO.2所示的反向引物，

所述内标引物对包括：

如SEQ ID NO.4所示的正向引物和如SEQ ID NO.5所示的反向引物；

所述探针组包括：

核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的第一探针和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的内控探针；

并且，所述第一探针的5’端包含有荧光报告基团，所述第一探针的3’端包含有荧光淬灭基团；所述内控探针的5’端包含有荧光报告基团，所述内控探针的3’端包含有荧光淬灭基团；所述第一探针的5’端荧光报告基团和所述内控探针的5’端荧光报告基团不同。

9.权利要求8所述的方法，其特征在于，所述核酸样本来自环境样本。