[发明专利]一种新型冠状病毒RT-PCR检测方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种新型冠状病毒2019‑nCoV实时荧光RT‑PCR检测方法及试剂盒，具体的地，本发明公开了一种检测新型冠状病毒2019‑nCoV的E基因核酸的试剂盒及方法，具有极高的灵敏度和特异性，并且能够显著提高病毒鉴定的准确性。

技术领域

本发明属于生物技术和分子诊断领域，具体地说，本发明涉及一种新型冠状病毒2019-nCoV实时荧光RT-PCR检测方法及试剂盒。

背景技术

2019年12月以来，陆续发现了多例不明原因肺炎病例，现已证实为一种新型冠状病毒感染引起的急性呼吸道传染病。基于目前的流行病学调查，潜伏期一般为3-7天，最长不超过14天。此次疫情临床表现以发热、乏力、干咳为主要表现。少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状。部分患者仅表现为低热、轻微乏力等，无肺炎表现，多在1周后恢复。

鉴于该病潜伏期患者也可进行人传人现象，目前迫切需要一种灵敏和精确的方法，用于快速检测2019新型冠状病毒感染所引起的肺炎的。而《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案》明确规定疑似病例，需要具备以下病原学证据之一者才能确诊：1.呼吸道标本或血液标本实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性；2.呼吸道标本或血液标本病毒基因测序，与已知的新型冠状病毒高度同源。

实时荧光RT-PCR是冠状病毒核酸检测常用方法之一，可用于实验室检查、流行病学研究、排除诊断等。该方法灵敏度高、特异性好，可以准确快速提供目标病毒的检测结果。目前，对新型冠状病毒感染的常规检测方法是通过实时荧光RT-PCR鉴定，主要针对新型冠状病毒基因组开放读码框1a/b（openreading frame 1ab，ORF1ab）和核壳蛋白（nucleocapsid protein，N）。但是，鉴于RNA病毒变异速度较快，容易对突变病毒造成漏检，不利于病毒的及时发现与防控。

因此，有必要开发针对性的检测体系，预防可能因突变而引起的漏检。

发明内容

本发明针对新型冠状病毒基因组膜蛋白（envelope protein，E）开发了新型冠状病毒诊断体系。以便能够高效率、高特异性、低成本的对新型冠状病毒2019-nCoV感染患者进行检测，并预防可能出现的变异性。

在本发明的第一方面，提供了一种用于检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的引物对集，所述引物对集包括：

第一引物对组，所述第一引物对组包括：

如SEQ ID NO.1所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.2所示的反向引物。

在另一优选例中，所述引物对集还包括：

内标引物对组，所述内标引物对组包括：

如SEQ ID NO.4所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.5所示的反向引物。

本发明的第二方面，提供了一种多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的探针组，所述探针组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的第一探针。

在另一优选例中，所述探针组还包括核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的内控探针。

在另一优选例中，各探针的5’端包含有荧光报告基团；和/或，各探针的3’端包含有荧光淬灭基团。

在另一优选例中，各探针标记的荧光报告基团互不相同。

本发明的第三方面，提供了一种用于多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的试剂盒，所述试剂盒包括本发明第一方面所述的引物对集。

在另一优选例中，所述试剂盒还包括本发明第二方面所述的探针组。