[发明专利]一种树鼩脉络膜新生血管动物模型的构建方法

说明书

本发明涉及一种树鼩脉络膜新生血管动物模型的构建方法，属于动物模型建立技术领域。本发明系统的应用单点激光法诱导构建树鼩脉络膜新生血管动物模型，可以实现树鼩CNV模型的成功诱导，且诱导出的CNV病灶从形态学、功能、血管生成相关促进、抑制因子变化趋势等方面均与人类疾病高度相似，模型诱导的时间从其他灵长类模型诱导的4周显著缩短为1周，填补了目前没有针对树鼩这一物种特定的CNV动物模型的空白，提高了建模的成功率。此外，本发明提供的观察分析方法简单，价格低廉，可以系统、动态观察分析CNV形成的过程和效率。

技术领域

本发明属于动物模型建立技术领域，具体涉及一种树鼩脉络膜新生血管动物模型的构建方法。

背景技术

脉络膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)是由多种病因所致的脉络膜新生血管芽穿越Bruch膜受损处，并在视网膜色素上皮(Retinal pigmentepithelium,RPE)下方生长，逐渐穿过RPE向视网膜神经上皮层延伸，增殖形成纤维血管组织。CNV常发生于黄斑区，引发黄斑区出血、视网膜下的浆液性渗出，为年龄相关性黄斑变性、高度近视黄斑病变、中心性渗出性脉络膜视网膜病变等多种眼底疾病的共同特征，严重影响患者的中心视力。眼底荧光血管造影(Fundus Fluorescein Angiography，FFA)和脉络膜血管造影(Indocyanine green angiography,ICGA)主要表现为新生血管的渗漏，伴有周围的出血、渗出，晚期引起脉络膜纤维化和视网膜瘢痕形成。引起的CNV相关疾病已经成为全球主要的致盲原因之一，在西方发达国家已经成为老年人的主要致盲性眼病，在我国的患病率也在不断上升。CNV形成的具体发病机制不清，目前认为可能与以下因素有关：1)长期氧化应激损伤及炎症反应，激活巨噬细胞(macrophages,MPs)、中性粒细胞等炎细胞聚集，以及小胶质细胞的活化，通过蛋白水解作用破坏了Bruch膜；2)炎症因子的释放及促血管生成因子和抗血管生成因子的平衡失调，引起病灶局部的微环境改变，促进了CNV的发生。但目前对CNV的具体发病机制，尤其是CNV发生相关的基因调控，仍有待进一步大量研究。

国内外的主要CNV建模方法包括激光诱导、生长因子诱导等。1981年，Archer等提出CNV形成的两个主要因素包括：Bruch膜的破裂和外层视网膜细胞结构成分的改变。在此理论基础上，Archer等成功利用激光光凝造成恒河猴视网膜内层血供减少和Bruch膜破裂，诱发CNV模型。氪激光诱导CNV的作用机制是用激光选择性破坏光感受器外界、RPE细胞、Bruch膜和脉络膜毛细血管，Bruch膜破坏后引发的一系列损伤修复过程，继而形成新生血管。其病理基础与人类CNV相同，即Bruch膜-视网膜色素上皮(RPE)-脉络膜毛细血管复合体损伤导致血管生成因子与抑制因子间平衡的破坏，使内皮细胞发生增生、移行和管腔形成等一系列新生血管形成过程，与其他诱导方式相比，激光诱导所产生的病理变化与人类自然病程更为相近。

目前，CNV模型常用的实验动物有猴、兔、鼠和猪。猴CNV模型的组织学病理及眼FFA/ICGA改变与人类疾病改变非常相似，实验性猴CNV模型中，CNV一般发生于光凝后4周，持续2-52周，虽然这种模型表现与人类极其相似，但动物来源有限，费用高昂，CNV诱发时间较长，发生率低等缺陷限制了其运用。而其他动物视网膜结构与人类差异较大，CNV形成后不具备人类疾病的典型特征，并非理想的模型动物。亟需开发一种更理想的CNV实验动物模型。

树鼩作为一种新型实验动物，近年来在生物医学研究中其应用范围越来越广，在人类疾病动物模型方面，树鼩开始得到应用，包括乳腺癌、乙肝、疱疹病毒感染、登革热病毒、HIV、糖尿病和神经系统等。由于树鼩具有很好的色觉、较高的辨色准确率，对光暗度很敏感，视觉系统比鼠、兔等动物更加发达，近年来很多研究应用于人类的近视和视觉发育研究。其视网膜以视锥细胞为主，感光度变化很敏感，这与人类的黄斑区功能很类似。树鼩的独特的视网膜结构为模拟人类黄斑区CNV的疾病过程提供了良好基础。但目前为止，还没有在树鼩上建立脉络膜新生血管动物模型的研究。

发明内容