[发明专利]短小蛇根草OpWRKY2转录因子的编码序列及其应用有效

专利信息
申请号: 202010140322.1 申请日: 2020-03-03
公开(公告)号: CN111321151B 公开(公告)日: 2021-07-20
发明(设计)人: 开国银;张锡晨;武超;郝小龙 申请(专利权)人: 浙江中医药大学
主分类号: C12N15/29 分类号: C12N15/29;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/76
代理公司: 杭州求是专利事务所有限公司 33200 代理人: 邱启旺
地址: 310053 浙*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 小蛇 opwrky2 转录 因子 编码 序列 及其 应用
【权利要求书】:

1. 一种短小蛇根草OpWRKY2转录因子,其特征在于,所述OpWRKY2转录因子的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示;所述OpWRKY2转录因子的氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。

2. 一种多肽,其特征在于,所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。

3. 一种重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体包含如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列。

4. 一种重组表达转化菌株,其特征在于,所述重组表达转化菌株包含如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列。

5.一种权利要求1所述的短小蛇根草OpWRKY2转录因子在提高短小蛇根草中喜树碱含量中的应用。

6.一种权利要求2所述的多肽在提高短小蛇根草中喜树碱含量中的应用。

7.一种利用OpWRKY2提高短小蛇根草毛状根中喜树碱含量的方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤1、对短小蛇根草的转录组数据库进行分析,从短小蛇根草cDNA文库中克隆得到短小蛇根草OpWRKY2基因;所述OpWRKY2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示;所述OpWRKY2基因的氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示;

步骤2、将所述OpWRKY2基因可操作性地连接于表达调控序列,形成含OpWRKY2基因的植物过表达载体;

步骤3、将含OpWRKY2基因的植物过表达载体转化发根农杆菌,得到具有所述植物过表达载体的发根农杆菌菌株;

步骤4、利用步骤3中构建的所述发根农杆菌菌株转化短小蛇根草,经抗生素筛选得到抗性毛状根,再经PCR检测为阳性的毛状根株系即为转基因短小蛇根草毛状根;

步骤5、对步骤4中得到的所述转基因短小蛇根草毛状根进行喜树碱含量的测定,进而得到喜树碱含量提高的短小蛇根草毛状根株系。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述步骤3中,采用冻融法进行转入,所述发根农杆菌为C58C1菌株。

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