[发明专利]基于海藻酸钠-铂纳米粒子氧化酶活性的原花青素检测方法

说明书

本发明公开一种基于海藻酸钠‑铂纳米粒子氧化酶活性的原花青素检测方法。本发明是基于海藻酸钠‑铂纳米粒子的氧化酶活性而建立的一种快速测定原花青素的紫外可视化分析方法。在最优显色条件下，检测线性范围为4~32.5μmol/L，最低检测限为2.0μmol/L，检测的灵敏度高；相关系数为0.999，检测的线性好；相对标准偏差RSD为0.6%，检测结果的精密度高。此外，本发明所使用的铂纳米粒子制备简便，底物TMB便宜易得，可操作性强。同时，本发明还具有稳定性高，重现性好，特异性强等优点，为原花青素的测定开辟了一条新的途径，并有望在黄酮类物质的筛选鉴定、研究分析等领域得到应用。

技术领域

本发明提供一种简单易行的比色分析方法用于原花青素检测，基于海藻酸钠-铂纳米粒子的氧化酶活性所建立的一种快速测定原花青素的紫外可见分析方法，属于分析化学和纳米技术领域。

背景技术

原花青素又名缩合鞣质，是广泛存在于葡萄、黑加仑、桑葚、蓝莓、松树皮、银杏等多种植物中的一大类多酚类化合物的总称。除植物外，一些日常饮用品如苹果汁、红葡萄酒中，也存在许多食源性的原花青素可被人们所摄取，其低聚物—低聚原花青素，是目前国际上公认的清除人体内自由基有效的天然抗氧化剂。原花青素具有很强的生物活性，在一些疾病的防治和美容养颜方面有着独特的功效。不仅如此，原花青素还具有降血脂、降血压、抗癌、抗辐射等功能。因此，原花青素有望在临床治疗、食品保健、护肤美颜等领域发挥重要作用。

然而，由于原花青素的组成和结构非常复杂，在国际上仍未形成统一的关于原花青素含量的测定方法。目前，对于原花青素的定量分析方法主要有分光光度法和高效液相色谱法，具体包括：硫酸-香草醛法、钼酸铵法、正丁醇-盐酸-HPLC法和硫解-HPLC法。这些方法的分析目的不同，定量分析原理不同，使用的对照品通常也不尽相同，而根据以往的文献，也未见有针对不同方法而进行较系统的评价和比较。并且这些方法检测过程比较复杂耗时，技术要求高，所需仪器昂贵，不能广泛应用于原花青素产品的测定。因此，建立一种简易高效的检测分析方法用于评估原花青素的抗氧化能力，有利于医药质量控制和顾客的消费指导，具有重要意义。

本发明采用具有良好氧化酶活性的海藻酸钠-铂纳米粒子。由于海藻酸钠-铂纳米粒子对底物3, 3’, 5, 5’-四甲基联苯胺盐酸盐（TMB）具有高效的氧化酶活性，可迅速催化TMB氧化显蓝色，同时，基于原花青素的抗氧化能力，能抑制TMB的氧化进而抑制显色反应的进行，因此，构建了一种测定原花青素的比色检测法。本发明具有稳定性好，灵敏度高，重现性好，成本低等优点，为原花青素实际样品的测定开辟了一条新的途径，并有望进一步在黄酮类物质的筛选研究领域得到应用。

发明内容

本发明的目的是基于海藻酸钠-铂纳米粒子良好的氧化酶活性，针对原花青素的抗氧化能力，构建了一种原花青素抑制海藻酸钠-铂纳米粒子对3, 3’, 5, 5’-四甲基联苯胺盐酸盐（TMB）进行氧化的显色体系。随着原花青素含量的增加，显色体系在最大紫外吸收波长450 nm处的吸光度不断下降。继而根据显色体系在波长450 nm处的吸光度差值ΔA₄₅₀（ΔA₄₅₀ = A₀ - A_t，其中A₀和A_t分别是不含原花青素和存在相应浓度原花青素时，反应产物在450 nm处的吸光度）对原花青素终浓度以10为底的对数值绘制标准工作曲线，于是，便可对原花青素实际样品进行定量检测。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种基于海藻酸钠-铂纳米粒子氧化酶活性的原花青素检测方法，其特征是利用生物相容性好且无毒的海藻酸钠作为纳米材料的保护剂来制备海藻酸钠-铂纳米粒子，所合成的材料在温和条件下就能快速催化溶解氧产生O₂^•−并氧化3, 3’, 5, 5’-四甲基联苯胺盐酸盐（TMB）产生颜色反应，并利用其良好的内在模拟氧化物酶活性对原花青素进行检测。