[发明专利]豇豆血红素铁结合蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.豇豆血红素铁结合蛋白在检测果蔬农药残留中的应用，其特征在于，所述检测果蔬农药残留的方法为以吲哚乙酸酯为底物检测酶活的酶抑制法，通过酶抑制率判定样品中是否含有农药；

豇豆血红素铁结合蛋白的制备方法，包括以下步骤：（1）将豇豆粉碎、与PB缓冲溶液混合后，震荡提取，静置2h后，离心得上清液；所述PB缓冲溶液浓度为0.02mol/L，pH值为6.5；所述豇豆粉碎后过100目筛，收集筛下成分，得豇豆粉；所述豇豆粉与所述PB缓冲溶液的质量体积比为1 g：（20~30）mL；所述震荡提取的温度为38~42℃，震荡频率为10~20 rpm，提取的时间为25~40 min；所述离心的转速为8000 rpm，时间为10min，所述离心温度为4℃；

（2）将所述上清液过凝胶层析柱分离纯化，以PB缓冲液作为流动相，流速设置为0.75mL/min，1.5MPa作为最大柱压值，紫外检测器波长为280nm，收集每个吸收峰下洗脱液；所述凝胶层析柱为Superdex-75凝胶层析柱；

（3）筛选所述洗脱液中比酶活为3~5U/μg，酶活＞0.6U/mL，且与氯化血红素结合能力Kd值3.50μM的部分，得到豇豆血红素铁结合蛋白；

所述豇豆血红素铁结合蛋白分子量为27.5kD；所述豇豆血红素铁结合蛋白的氨基序列与豇豆的albumin-2-like蛋白序列XP_017414661.1相同；

所述果蔬农药残留为有机磷和氨基甲酸酯类农药；所述氨基甲酸酯类农药为氧化乐果、涕灭威、灭多威、残杀威、克百威。