[发明专利]一种抗PD-1抗体的制备方法

权利要求书

1.一种抗PD-1抗体的制备方法，其特征在于，所述抗PD-1抗体的重链可变区含有SEQID NO：1所示的CDR1区、SEQ ID NO：2所示的CDR2区、SEQ ID NO：3所示的CDR3区；轻链可变区含有SEQ ID NO：4所示的CDR1区、SEQ ID NO：5所示的CDR2区、SEQ ID NO：6所示的CDR3区；将所述抗PD-1抗体序列转入CHO宿主细胞，进行无血清基础培养基、无血清补充培养基流加式培养，获得无糖基化的抗PD-1抗体。

2.根据权利要求1所述的一种抗PD-1抗体的制备方法，其特征在于，所述抗PD-1抗体具有SEQ ID NO：8所示的重链氨基酸序列、具有SEQ ID NO：10所示的轻链氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的一种抗PD-1抗体的制备方法，其特征在于，所述无糖基化的抗PD-1抗体的宿主细胞培养表达步骤包括：无血清基础培养基于pH为6.5~7.0，培养温度为33℃~37℃，渗透压为290mOsm/kg~350 mOsm/kg条件下培养；基础培养12-24小时，当细胞生长密度达到2.0-3.5×10⁶cells/ml时，补加补无血清补充培养基。

4.根据权利要求3所述的一种抗PD-1抗体的制备方法，其特征在于，所述无糖基化的抗PD-1抗体的宿主细胞培养表达步骤中无血清基础培养基于pH为6.6，培养温度为37℃，渗透压为340 mOsm/kg条件下培养。

5.根据权利要求3所述的一种抗PD-1抗体的制备方法，其特征在于，所述无糖基化的抗PD-1抗体的宿主细胞培养表达步骤中无血清补充培养基于pH为6.6，培养温度为34℃，渗透压为340 mOsm/kg条件下培养。

6.一种抗PD-1抗体的制备方法，其特征在于，经过权利要求1~5所述的无糖基化抗PD-1抗体的细胞培养表达后，获得的抗PD-1抗体的纯化步骤包括：a）亲和层析；b）低pH值孵育、聚体去除；c）离子交换层析；d）过滤。

7.根据权利要求6所述的一种抗PD-1抗体的制备方法，其特征在于，所述无糖基化抗PD-1抗体的纯化步骤中，所述亲和层析为proteinA亲和层析。

8.根据权利要求6所述的一种抗PD-1抗体的制备方法，其特征在于，所述无糖基化抗PD-1抗体的纯化步骤中，所述低pH值孵育、聚体去除包括： pH为3.5~3.8，室温，孵育1~2h；孵育后pH调至5.5~6.0，室温放置16~24hr，去除聚体。

9.根据权利要求6所述的一种抗PD-1抗体的制备方法，其特征在于，所述无糖基化抗PD-1抗体的纯化步骤中，所述离子交换层析为阳离子交换层析、或阴离子交换层析、或阳离子交换层析与阴离子交换层析相结合。

10.根据权利要求9所述的一种抗PD-1抗体的制备方法，其特征在于，所述无糖基化抗PD-1抗体的纯化步骤中，所述离子交换层析为阳离子交换层析与阴离子交换层析相结合：经过聚体去除后的溶液进行阳离子交换层析；阳离子交换层析洗脱液进行阴离子交换层析，收取阴离子层析上样流出液。

11.根据权利要求6所述的一种抗PD-1抗体的制备方法，其特征在于，所述无糖基化抗PD-1抗体的纯化步骤中，所述过滤包括：除病毒过滤、超滤浓缩、及降低生物负荷过滤。