[发明专利]一种杜仲发酵提取液及其制备方法和其在化妆品中的应用

权利要求书

1.一种杜仲发酵提取液的制备方法，其中包括以下步骤：

制备复合菌种的步骤，在该步骤中，对巴氏醋杆菌（Acetobacter pasteurium）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）和酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）分别进行预培养，以得到复合菌种；

酶解杜仲粉以制备发酵基质的步骤，在该步骤中，杜仲叶经过清洗、干燥、粉碎成粉，加水混匀，然后添加蛋白酶、纤维素酶和果胶酶进行酶解，以得到经酶解的杜仲酶解液，基于此酶解液制得发酵基质；

进行发酵的步骤，在该步骤中，将复合菌种以相对于发酵基质体积5%-10%的总接种量接种至含有经酶解的杜仲酶解液的发酵基质中，在低溶氧条件下进行发酵，以得到发酵液；

进行纯化的步骤，在该步骤中，对上述得到的发酵液进行离心、过滤，以得到杜仲发酵提取液；

其中，在制备复合菌种的步骤中，对所述巴氏醋杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母分别进行预培养得到三种菌种的预培养液，为利用复合菌种发酵，在后续的发酵过程中所接种的巴氏醋杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母的预培养液的体积比为：1:1~6：0.6~4;

其中，预培养液中，所述巴氏醋杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母的菌浓度满足：

巴氏醋杆菌预培养液中的菌浓度在1×10⁷ cfu/mL以上，

植物乳杆菌预培养液中的菌浓度在8×10⁸cfu/mL以上，

酿酒酵母预培养液中的菌浓度在3×10⁸ cfu/mL以上；

其中，在酶解杜仲粉以制备发酵基质的步骤中，杜仲叶的质量分数为5%-15%，蛋白酶的添加量为选取的杜仲叶重量的0.1%-0.5%，纤维素酶的添加量为选取的杜仲叶重量的0.2%-1.0%，果胶酶的添加量为选取的杜仲叶重量的0.1%-1.0%，而且各个酶的比活力都不低于3000 U/g；

其中，在酶解杜仲粉以制备发酵基质的步骤中，酶解反应条件为：pH值3.5-6.5，温度45℃-60℃；

对巴氏醋杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母同时接种，培养过程中溶氧控制为10%-40%。

2.如权利要求1所述的方法，其中，在酶解杜仲粉以制备发酵基质的步骤中，酶解反应条件为：pH值3.5-6.5，温度45℃-60℃，酶解时间1 h -3.5 h，在确定酶解工艺结束时，煮沸3 min -5 min，使酶失活。

3.如权利要求1所述的方法，其中，发酵基质除含有杜仲酶解液外，还包括：氮源、碳源、无机盐以及余量的饮用水，其中所述氮源选自酵母粉、胰蛋白胨、大豆蛋白胨或牛肉膏中的任意种；所述碳源选自蔗糖、葡萄糖、乳糖或半乳糖中的任意种；所述无机盐选自NaCl，K₂HPO₄。

4.如权利要求3所述的方法，其中，相对于100重量份的发酵基质，所述氮源为1份~5份，所述碳源为1份~5份，NaCl为0.1份~0.5份，K₂HPO₄为0.1份~0.5份。

5.如权利要求1所述的方法，其中，在进行发酵的步骤中，发酵温度为30℃-35℃，发酵基质的pH调整为6.0-7.0，发酵时间为36 h -48 h，以无残留碳源被检测出则判断为发酵终点。

6.如权利要求1所述的方法，其中，在进行纯化的过程中，离心的条件设置为：9000 rpm转速下离心至少20分钟，去除菌体；在进行纯化的过程中，过滤的条件设置为：添加1%活性炭，55℃吸附1 h，再分别通过1.2 μm精细滤板，0.22 μm精细滤芯过滤。

7.使用如权利要求1至6的任一项所述的方法制得的杜仲发酵提取液。

8.根据权利要求7所述的杜仲发酵提取液的用于制备化妆品的用途。