[发明专利]一种新型冠状病毒的试剂盒及其单独闭管一步法检测新型冠状病毒核酸的方法

说明书

本发明公开了一种新型冠状病毒的试剂盒及其单独闭管一步法检测新型冠状病毒核酸的方法，本发明的一种单独闭管一步法检测新型冠状病毒核酸的试剂盒，包括引物、挂锁探针和RCA标准品，所述的RCA标准品具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；所述的挂锁探针具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；所述引物具有SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。本发明的2019‑CoV核酸的现场快速检测产品，缩短检测用时，提升便捷程度，推动诊断前移下移，实现疑似患者的快速诊断和密切接触人群的现场筛查。

技术领域

本发明涉及生物科学技术领域，具体涉及新型冠状病毒的试剂盒及其单独闭管一步法检测新型冠状病毒核酸的方法。

背景技术

新型冠状病毒肺炎(NCP)疫情暴发以来，对病毒的早发现和早识别一直都是疫情防控的源头，这期间快速诊断检测技术在NCP患者临床诊断和疑似患者排查中显示出了极大的应用价值。

目前正在临床使用的实时定量荧光PCR(qPCR)核酸检测试剂盒的迅速上市和临床应用在NCP疫情防控期间发挥了重要作用，但是，受操作繁琐、耗时长、阳性率低、需要集中送检等限制，还不能满足当前快速增长的大量疑似患者、无症状感染者等排查诊断的检测需求。一方面qPCR所需的试剂和设备并不总是容易获得，具有对人员和场所的特殊要求。另一方面该检测技术步骤复杂，操作过程中样品多次暴露于空气中，操作不当容易造成二次污染。

近期随着IgM/IgG抗体检测试剂的研发成功，有望能够弥补核酸检测的缺陷。抗体检测的方法属于免疫学诊断，对病毒感染具有重要的诊断意义。但是在2019-CoV感染初期，病人抗体含量很低，容易导致漏检而造成假阴性。NCP 的早期筛查能够最大程度的阻断病原的更大规模的扩散，防止造成更多人的感染，并且可以让患者第一时间接受治疗，增加治愈率。因此，核酸检测试剂仍是诊断早筛的主要手段。

根据上述分析，想要实现对NCP的早期快速筛查，首先检测装置要一体化，一管式反应，其次该检测技术不应需要精密仪器和严苛的实验条件，最后在结果显示上应直观明了。目前的检测技术利用qPCR过程大量扩增目的片段，并利用标记有荧光的特异性探针检测大量扩增的目的片段。该扩增过程是变温过程，需要反复的热循环及精密仪器。近年来出现及迅猛发展的等温核酸扩增技术有望成为未来发展的新趋势，在恒温条件下可发生快速且高效的扩增反应。其中滚环扩增(RCA)技术和杂交级联扩增技术(HCR)作为常用的等温核酸扩增方法,可以实现目标核酸的短时大量扩增,有着操作简便、特异性强和灵敏度高的特点。并且RCA过程中用到的酶在室温条件下依旧具有较高的活性，可以满足不需要调温设备常温扩增的需求，而HCR过程不需要酶的参与。据大量的研究成果可知在疾病的早期核酸检测和检测分析中RCA和HCR已经成为很有潜力的分析工具。核酸检测的信号输出方式有荧光、颜色、电化学信号等，其中比色具有直观、简便、快速和适合于现场监测的优点。G四链体作为信号输出模块，比色是其最常用的信号输出方式之一。Hemin(氯化血红素)是过氧化氢酶的活性辅助因子，Hemin可以与G四链体结构结合形成G四链体/Hemin拟酶，该拟酶可以替代辣根过氧化酶催化氧化比色反应，如催化H₂O₂氧化TMB发生变色反应。

为了推进对NCP的诊断，目前急需2019-CoV核酸的现场快速检测产品，缩短检测用时，提升便捷程度，推动诊断前移下移，实现疑似患者的快速诊断和密切接触人群的现场筛查。如何实现单独闭管进行核酸检测一体化，实现“样本进，结果出”的现场快速检测，解决“开盖”问题，是目前亟待解决的一大瓶颈。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速检测的新型冠状病毒的试剂盒及其单独闭管一步法检测新型冠状病毒核酸的方法。

本发明的技术方案如下：本发明的一种单独闭管一步法检测新型冠状病毒核酸的试剂盒，包括引物、挂锁探针和RCA标准品，所述的RCA标准品具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；所述的挂锁探针具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；所述引物具有SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。