[发明专利]一种活动精子DNA碎片流式细胞术检测方法

权利要求书

1.一种活动精子DNA碎片流式细胞术检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将精液中5～10万个精子加入到500μL酸化处理缓冲液中，混匀，置冰上30秒；

(2)在步骤(1)得到的混合液中加入10μL染色液，5-30分钟内上机检测，设定流式细胞仪的参数，包括激发波长和激发波长通道，收集精子的绿色、黄色和红色荧光信号，每管样本至少记录样本主群5000个细胞；

(3)流式软件统计分析：结合三种荧光情况分析，即首先在黄色荧光的基础上将活动精子与不动精子区分出来，再进一步分析活动精子中红色荧光精子占活动精子总数的比例，从而可以判定样本中活动精子DNA碎片化情况。

2.根据权利要求1所述的一种活动精子DNA碎片流式细胞术检测方法，其特征在于：步骤(1)所述的酸化处理缓冲液的配方为80-800mmol/L盐酸、14-28mmol/L钼酸铵、0.15mol/L氯化钠、0.1％Triton-X 100，溶剂为水。

3.根据权利要求1所述的一种活动精子DNA碎片流式细胞术检测方法，其特征在于：步骤(1)所述的染色液的配方为20-400mmol/L罗丹明6G、1-50μg/mL吖啶橙、0.1mol/L柠檬酸、0.2mol/L磷酸氢二钠，1mmol/L乙二胺四乙酸，0.15mol/L氯化钠，溶剂为水。

4.根据权利要求3所述的一种活动精子DNA碎片流式细胞术检测方法，其特征在于：步骤(1)所述的染色液的配方为60mmol/L罗丹明6G、6μg/mL吖啶橙、0.1mol/L柠檬酸、0.2mol/L磷酸氢二钠，1mmol/L乙二胺四乙酸，0.15mol/L氯化钠，溶剂为水。