[发明专利]一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒及其制备使用方法

说明书

本发明涉及生物检测试剂制备领域，提供了一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒，包括试剂R1和试剂R2。试剂R1包括缓冲液、S‑腺苷甲硫氨酸、NADH、三(2‑羧乙基)膦氯化氢、防腐剂、稳定剂、表面活性剂。试剂R2包括缓冲液、无机盐、S‑腺苷同型半胱氨酸水解酶、a‑酮戊二酸、谷氨酸脱氢酶、HCY甲基转移酶、腺苷脱氨酶、防腐剂、稳定剂、表面活性剂。本发明还提供了一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒的制备使用方法。本发明试剂盒用于测定HCY的含量，其操作简便、检测速度快、精密度高、易于自动化，且适于大批量标本同时检测。

技术领域

本发明涉及生物检测试剂制备领域，尤其涉及一种基于循环酶速率法测定HCY的试剂盒及其制备使用方法。

背景技术

同型半胱氨酸(HCY)在血浆中分两种形式存在：“氧化型同型半胱氨酸”和“还原型同型半胱氨酸”。还原型同型半胱氨酸中游离的巯基具有高度活性，其容易氧化，从而形成二硫化物的形式。氧化型是同型半胱氨酸在血浆中的主要存在形式，以二硫化物形式或是与蛋白质共价结合的形式存在。

HCY可使氧化自由基大量产生引起内皮细胞损伤，使脂质过氧化和氧化型的低密度增加，从而对血管造成的损伤和破坏。在HCY的作用下，破损的血管壁生成了斑块，促进动脉粥状硬化。

HCY主要临床应用如下：

1、心血管病防治

(1)HCY升高与动脉粥样硬化(AS)的关系

1969年就曾有人从尸检中发现2例血浆HCY浓度超过正常人几十倍的病人存在广泛的动脉粥样硬化和动脉血栓。临床上发现，高胱氨酸尿症病人早年多因全身动脉粥样硬化和血栓形成死于脑梗塞和心肌梗塞，这与血中HCY升高有关。

(2)HCY水平与心血管疾病的危险性

通过血管内超声观察AS斑块情况观察到，当血浆HCY浓度8umol/L时，斑块较小(0.17-0.76mm)；当血浆HCY浓度8umol/L时，斑块明显增大(0.27-1.04，p0.001)，表明与冠状动脉病变程度呈正相关。轻度、中度HCY水平升高可使心血管疾病死亡危险性增加4-6倍，血浆总HCY水平每升高5μmol/L，则CHD危险性男性增加60％，女性增加80％。

2、HCY与神经系统疾病

脑血管病是目前严重危害人类健康的主要疾病。近年来，随着分子生物学的深入发展，HCY在脑卒中的作用日益受到重视，普遍认为血浆HCY15umol/L为高HCY血症，普通人群血浆HCY水平升高者只有不到5％，而在脑卒中患者中可达30-40％

HCY的升高是与中风有重要关联的危险因子。美国最新的数据显示中年后期男性中风发病率，处于55-64这个年龄段的男性相对于45-54年龄段的男性而言，前者患中风的几率是后者的三倍。

高HCY是造成老年痴呆症与帕金森的重要因素。

3、糖尿病及并发症防治

国内外大量研究结果显示，血浆HCY水平可作为2-型糖尿病患者患大血管疾病的独立危险因素。

监测糖尿病患者HCY水平，有利于对其预后的评估。HCY升高在糖尿病伴肾脏、视网膜及血管并发症的患者更为严重。高HCY血症也能促进糖尿病微血管并发症的发生与发展。

4、慢性肾衰并发症防治

慢性肾功能衰竭(CRF)患者普遍有高HCY血症，其发生率是正常人33倍。

尿毒症时，一方面肝脏蛋氨酸腺苷转移酶活性升高，导致S-腺苷蛋氨酸水平升高；另一方面肾功能下降，使HCY代谢的必需产物-丝氨酸合成减少，导致HCY代谢受抑制引起HCY的堆积。

5、肺血栓栓塞症防治