[发明专利]一种基于检测包虫特异性抗原及其编码基因的早期诊断方法

权利要求书

1.一种基于检测包虫特异性抗原的早期诊断方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、取样：选择年龄段在20-40岁之间的群体作为诊断对象，取上述患者在上午7-8点时段排出的新鲜粪便，并盛放在专用的粪便盒内；

S2、样品处理：将步骤S1盛放有新鲜粪便的粪便盒放置在医用冷冻容器中，冷冻温度为-60℃，冷冻时间至少持续一周，对虫卵进行灭活处理；

S3、样品稀释：将步骤S2中处于冷冻状态的粪便样品，取10-20g，并倒入稀释容器中，额外添加10-20ml的粪便稀释液，利用搅拌棒，充分搅拌，获得样液；

S4、样液离心取上清液：将步骤S3所获取的样液，添加至医用离心机中，离心机的速度控制为5000-6500rpm，离心时间为15-20min，获得样液的上清液，取出，备用；

S5、上清液加药反应：将步骤S4中所获取样液的上清液，用胶头滴管，滴加2-4滴至反应板中，额外向反应板中添加诊断试剂，利用生物保鲜膜对反应板进行密封处理，转移至恒温箱中，避光反应1-1.5h，获得反应液；

S6、显色反应：向步骤S5中所获取的反应液，滴加3-5滴显示剂，同样转移至恒温箱中，避光反应15-20min；

S7、酶标测试，判断结果：利用酶标仪，在波长为450nm的光波下，读取步骤S6中反应后溶液的吸光值，并依据此吸光值与阴性溶液吸光值之间的倍数，来判断是否存在包虫特异性抗原。

2.根据权利要求1所述的一种基于检测包虫特异性抗原的早期诊断方法，其特征在于，所述步骤S1中的粪便盒，为医用不锈钢材质，且需经过高温消毒处理。

3.根据权利要求1所述的一种基于检测包虫特异性抗原的早期诊断方法，其特征在于，所述步骤S5中，诊断试剂选用包虫抗体酶标结合物。

4.根据权利要求1所述的一种基于检测包虫特异性抗原的早期诊断方法，其特征在于，所述步骤S5中，恒温箱的内部温度为34-37℃，步骤S6中，恒温箱的内部温度为35-37.5℃。

5.根据权利要求1所述的一种基于检测包虫特异性抗原的早期诊断方法，其特征在于，所述步骤S7中，经酶标仪检测后，所获得反应后溶液的吸光值与阴性溶液吸光值之间的倍数为2.9-3.1倍时，即判断存在包虫特异性抗原。

6.一种基于检测包虫编码基因的早期诊断方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、样本获取：采集受检者的血液样本，并将获取的血液样本盛放在采血容器中；

B、获取血清：将步骤A中盛放有样本血液的采血容器放置在医用离心机内，离心处理3-4min后，获得血清液，盛放在血清专用储瓶中；

C、基因组DNA提取：利用浓盐法，从步骤B中所获得的血清中，提取游离的DNA分子；

D、序列测定：基于DNA的二代测序技术，对步骤C中获得的DNA分子进行测序处理，获得DNA的样品序列；

E、DNA的PCR扩增：用步骤D中所获得的DNA样品序列中相对较长的片段，进行多重聚合酶链反应，并在反应中加入引物对，获得DNA扩增序列；

F、比对筛分：基于生物信息学分析技术，将步骤E所获得的DNA扩增序列与患有包虫病患者的参考样品序列进行比对；

G、获得结果：经步骤F的比对处理，得到该游离DNA中是否含有包虫病早期进程的包虫来源或宿主特异性反应来源的分子。

7.根据权利要求6所述的一种基于检测包虫编码基因的早期诊断方法，其特征在于，所述步骤E中所加入的引物对是用荧光染料标记的寡核苷酸引物。