[发明专利]用于检测花生黑腐病菌的LAMP检测引物及其检测方法

权利要求书

1.用于检测花生黑腐病菌的LAMP检测引物，其特征在于：所述LAMP检测引物，包括一对外引物和一对内引物；

外侧引物：

TF3：TGACACTGTGCTGACTCTCA，

TB3：GCTGAAGGACAGAAGCTGAG；

内侧引物：

TFIP：GCTTGTCAAGAACCCAGGCGT-AAACAGGAAGCCGCTGAAC，

TBIP：CCGAGCGTGAGCGTGGTATC-GACGGTGACATCGTACTTGG。

2.利用权利要求1所述的LAMP检测引物用于检测花生黑腐病菌的方法，其特征在于：利用所述LAMP检测引物进行扩增，LAMP反应体系为25µl，包括5µM外侧引物TF3和TB3各0.25µl，40µM内侧引物TFIP和TBIP各0.25µl，反应混合液18.0µl，8UBst DNA 聚合酶1µl，DNA模板25ng，用灭菌超纯水补足至25 µl；LAMP反应条件为60-63℃温育60 min，82℃保温5min；所述的反应混合液中各组分的浓度为40mM Tris-HCl，20mM (NH₄)₂SO₄，20mM KCl，16mMMgSO₄，0.2% Triton X-100，1.6M Betaine，2.8 mM dNTPs；

在LAMP反应的扩增产物中加入显色剂SYBR green І 1µl，显色结果观察到绿色荧光判断为阳性，橙色判断为阴性；取2µl扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测，出现梯形条带判断为阳性，没有出现则判断为阴性。