[发明专利]一种预测甘薯种薯SPCSV带毒率的方法有效
申请号: | 202010149287.X | 申请日: | 2020-03-04 |
公开(公告)号: | CN111334584B | 公开(公告)日: | 2022-08-16 |
发明(设计)人: | 张振臣;王爽;田雨婷;赵付枚;乔奇;秦艳红;王永江;张德胜 | 申请(专利权)人: | 河南省农业科学院植物保护研究所 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
代理公司: | 郑州市华翔专利代理事务所(普通合伙) 41122 | 代理人: | 张爱军 |
地址: | 450000 河*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 预测 甘薯 spcsv 带毒率 方法 | ||
1.一种预测甘薯种薯SPCSV带毒率的方法,其特征在于,甘薯繁种田烟粉虱发生量和/或烟粉虱带毒率,与种薯带毒率有紧密的关联性,根据甘薯田烟粉虱发生量、烟粉虱带毒率与种薯带毒率之间的关系,建立通过调查甘薯繁种田烟粉虱发生量和烟粉虱带毒率,进行预测种薯SPCSV带毒率的方法;
所述的甘薯繁种田烟粉虱发生量、烟粉虱带毒率与种薯带毒率之间的关系为:Y=9.628X1+0.008X2+6.537,R2=0.914,其中,Y为种薯带毒率,X1为烟粉虱带毒率,X2为烟粉虱发生量,头/黄板。
2.根据权利要求1所述的预测甘薯种薯SPCSV带毒率的方法,其特征在于,所述甘薯繁种田烟粉虱发生量和烟粉虱带毒率的计算包括以下步骤:
(1)烟粉虱发生量调查:利用黄板诱集法调查和计算甘薯繁种田烟粉虱发生量;
(2)烟粉虱活体采集:调查甘薯繁种田烟粉虱数量的同时,采集烟粉虱活体带回实验室置于-70℃保存,用于检测烟粉虱带毒率;
(3)烟粉虱带毒率的检测:利用TakaRa公司生产的Trizol试剂盒提取烟粉虱的总RNA:方法是用牙签挑取单头烟粉虱放到1.5mL离心管中,加入30μL Trizol,用一次性研磨棒充分研磨,再向离心管里加入170μL Trizol,然后按照Trizol试剂盒说明书进行操作;
反转录:取RNA样品800ng为模板,利用RevertAid Reverse Transcriptase试剂盒反转录合成cDNA第一链,具体操作步骤参照试剂盒说明书进行;
用1%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物,AlphaImager Mini凝胶成像仪观察,记录PCR阳性烟粉虱头数和对应的检测总头数;进而计算烟粉虱SPCSV的带毒率。
3.根据权利要求2所述的预测甘薯种薯SPCSV带毒率的方法,其特征在于,所述黄板诱集法的调查方法为:选取要调查的甘薯繁种田,每年的7月上中旬,烟粉虱初发生时开始在甘薯田悬挂黄色诱虫板,黄色诱虫板规格为40cm×25cm;黄色诱虫板的下缘高于薯苗5cm-10cm进行悬挂,密度为每亩20块诱虫板,每10天调查一次,记录每块诱虫板上诱集的烟粉虱数量和对应时间,算出平均每块诱虫板上的烟粉虱数量,并更换新的诱虫板。
4.根据权利要求2所述的预测甘薯种薯SPCSV带毒率的方法,其特征在于,所述步骤(3)中PCR的操作步骤如下:
PCR:以合成的cDNA为模板,利用Ex Taq DNA聚合酶进行PCR扩增;
反应体系为:2×Premix Ex Taq 10.0μL、5pmol/L正向引物和反向引物各2.0μL、300ng/μLcDNA模板4μL,RNase-Free水补足至20.0μL;
所述的正向引物为:5′-TGGGAAGAMGAGAYATGGAG-3′;
反向引物为:5′-GAGCGTTCCTTTTCATCATC-3′;
扩增程序:95℃预变性5min;95℃变性30s,53-57℃退火30s,72℃延伸40s,35个循环;72℃延伸10min。
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