[发明专利]小麦全蚀病菌禾顶囊壳LAMP检测引物组及方法有效
| 申请号： | 202010149611.8 | 申请日： | 2020-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN111088395B | 公开（公告）日： | 2023-02-03 |
| 发明（设计）人： | 崔林开;胡艳红;和志华;李梦琪;邓俊丽 | 申请（专利权）人： | 河南科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 洛阳公信知识产权事务所(普通合伙) 41120 | 代理人： | 时亚娟 |
| 地址： | 471000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 小麦 病菌 禾顶囊壳 lamp 检测 引物 方法 | ||
1.小麦全蚀病菌禾顶囊壳LAMP检测引物组在小麦全蚀病菌禾顶囊壳检测方面的应用，其特征在于：所述LAMP引物组包括四条特异性引物，具体如下：
QS-FIP：CAGGGTTTGTAACCTCCGGCACATACCTTTACTGTTGCTTC；
QS-BIP：AACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTACTTATCGCATTTCGCTG；
QS-F3：AAACTCCAACCCCTGTGA；
QS-B3：ACTGAATTCTGCAATTCACA；
所述四条特异引物的靶标基因为小麦全蚀病菌禾顶囊壳的ITS。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测的方法，包括以下步骤：
步骤一、提取基因组DNA：选取小麦植株的发病部位，提取基因组DNA，测定提取的基因组DNA的浓度和纯度，作为模板DNA，备用；
步骤二、确定反应体系：每25μL反应体系中，由以下成分组成：2.5 μL 10×ThermoPolBuffer，1.5 μL 100 mM MgSO4、3.5 μL 10 mM dNTPs、10 μM QS-FIP和QS-BIP各4 μL、10 μM QS-F3和QS-B3各0.5 μL、1μL 8000U/mL Bst DNA Polymerase和1μL模板DNA，灭菌超纯水补足25 μL；
步骤三、执行反应程序：将步骤二中所述反应体系中的试剂混均匀后，置恒温64℃水浴锅中反应60 min，然后向反应体系中加入 1μL核酸染料SYBR Green I，混匀后观察反应体系颜色的变化，在波长440～485 nm照射下，阳性为荧光黄绿色，阴性为橙色。
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