[发明专利]检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的RT-LAMP引物组及试剂盒

权利要求书

1.检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的RT-LAMP引物组及试剂盒，其特征在于引物组包括6条引物，序列如下：

引物F3：5’-TGGTATATTAGAGTAGGAGCTAGA-3’(SEQ ID NO:1)，

引物B3：5’-AGTCTTCATAGAACGAACAAC-3’(SEQ ID NO:2)，

引物FIP：5’-TCGATGTACTGAATGGGTGATTTAGTCAGCACCTTTAATTGAATTGTG-3’(SEQ ID NO:3)，

引物BIP：5’-TACAGTTTCCTGTTCACCTTTTACAGCACTACAAGACTACCCAATT-3’(SEQ ID NO:4)，

引物LF：5’-ATTAATTGCCAGGAACCTA-3’(SEQ ID NO:5)

引物LB：5’-AACCAGCCTCATCCACG-3’(SEQ ID NO:6)

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于外侧引物(F3、B3)：内侧引物(FIP、BIP)：环引物(LF、LB)的摩尔比为1：8：4，每25ul RT-LAMP反应体系中含有引物F3、B3各5pmol，引物FIP、BIP各40pmol，引物LF、LB各20pmol。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于包括2×RT-LAMP反应液、阳性对照、阴性对照、DEPC水以及权利要求1或2所述的引物组。

4.根据权利要求1或3所述的2×RT-LAMP反应液，其特征在于2×LAMP反应液中含有的各组分及其浓度为：40mM Tris-HCl(pH8.8)，20mM KCl，16mM MgSO₄，20mM(NH₄)₂SO₄，0.2％吐温20，1.6M甜菜碱，2.8mM dNTPs，1.28U/ul Bst DNA聚合酶，16U/ul AMV逆转录酶，1.6U/ul RNA酶抑制剂，0.1mM钙黄绿素，1.2mM MnCl₂。

5.根据权利要求1或3所述的阳性对照，其特征在于SARS-CoV-2的ORF8基因全长DNA连接至pUC57载体筛选鉴定的阳性重组质粒，经体外转录获得RNA片段，经HPLC纯化后获得阳性对照品，1ug质粒拷贝数为3.157×10¹¹。

6.根据权利要求1所述的引物组及试剂盒，其检测步骤为：向置冰盒内的反应管中添加引物组7ul、2×RT-LAMP反应液12.5ul、阳性模板1ul或待检样品RNA 1-3ul，用DEPC水补足体积至25ul，盖好反应管的盖子，混匀反应液，瞬时离心，使反应液位于管底，将反应管置水浴锅、金属浴、温箱或PCR仪中，在58-65℃范围内选择某一固定温度恒温扩增40-60分钟，优选为63℃扩增50分钟，然后85℃作用5分钟终止反应，在自然光或紫外灯下观察反应液的颜色，若反应液的颜色变为绿色，则判定待测样品中含有新型冠状病毒SARS-CoV-2；若反应液颜色仍为原来的棕褐色，则判定待测样品中不含新型冠状病毒SARS-CoV-2。

7.根据权利要求1所述的引物组及试剂盒，其特征在于在检测临床样品中是否存在新型冠状病毒SARS-CoV-2时应用。