[发明专利]检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的RT-LAMP引物组及试剂盒

说明书

本发明公开了检测新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的RT‑LAMP引物组及试剂盒。用于检测SARS‑CoV‑2的引物组包括外引物F3、B3，内引物FIP、BIP，及环引物LF、LB共6条引物，其序列如SEQ ID NO:1至NO:6所示。上述引物组能准确检测新型冠状病毒SARS‑CoV‑2，与其它冠状病毒无交叉反应，同时与其它致肺炎病毒无交叉反应。引物组与RT‑LAMP反应液、阳性对照、阴性对照、DEPC水组成SARS‑CoV‑2的RT‑LAMP试剂盒。在63℃等温扩增最快20分钟能检测出SARS‑CoV‑2，检测灵敏度达到80拷贝/μL。本发明具有简便、快速、灵敏、特异的优点，不需要借助昂贵仪器即可肉眼观察判定结果，能实现对SARS‑CoV‑2的快速、精准检测，适用于现场检测和国内多数缺乏实时荧光PCR仪的基层医院等机构临床检测使用，对新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的确诊、监测与防控具有重要意义。

技术领域

本发明属于病毒核酸检测技术领域，涉及快速显色一步法检测新型冠状病毒SARS-CoV-2 的RT-LAMP引物组、试剂盒及检测方法。

背景技术

新冠肺炎的病原为新型冠状病毒SARS-CoV-2。基因组序列比对分析发现，SARS-CoV-2 与能引起重症肺炎的另外两种冠状病毒--严重急性呼吸综合征病毒(SARS-Cov)、中东呼吸综合征病毒(MERS-Cov)同属于冠状病毒科β病毒属，但SARS-CoV-2与SARS-Cov、MERS-Cov的同源性分别仅为79.5％、40％。上述3种冠状病毒能引发人的重症肺炎，除此以外，还有地方性人冠状病毒能引起人的轻度流行性感冒，代表毒株有HKU1、OC43、NL63 和229E等。

人的病毒性肺炎占呼吸道感染的70～80％。能引起肺炎的病毒除SARS-CoV-2、MERS-Cov、SARS-Cov三种冠状病毒外，还有高致病性禽流感病毒(H7N9、H5N1等)、季节性流感病毒(如甲型H1N1、乙型Victoria等)、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、腺病毒、副流感病毒、肠道病毒、单纯疱疹病毒、人类偏肺病毒、呼肠病毒、麻疹病毒、巨细胞病毒等。以季节性流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒最为常见。

只有做到SARS-CoV-2与其它重要肺炎病毒的鉴别诊断，才能实现新冠肺炎的早诊断、早隔离、早治疗、早控制，早日战胜新冠肺炎疫情。

新冠肺炎的诊断是依靠流行病学调查、临床症状(发热、咳嗽、呼吸困难等)和CT检查结果，确定为疑似病例。最终确诊要依赖病毒的核酸检测。

常用的病毒检测方法有病毒分离培养与电镜观察法、免疫学检测、分子生物学检测等。从患者体内或标本中分离到病毒是唯一令人信服的“金标准”，但由于条件限制，对每一位患者标本进行病毒分离和培养是不可能的。电镜观察法需要获得病毒，耗时长，多数机构没有条件，而且多数病毒没有指证性的形态。免疫检测法对于那些容易发生抗原变异的病毒的检测特异性、灵敏度低。而分子生物学检测法具有特异、灵敏、准确等优点。常用于鉴定病毒的分子生物学方法有PCR、多重PCR、荧光PCR、基因组测序等。PCR或多重PCR需要结合电泳和成像观察才能判定结果，耗时长。荧光PCR、基因组测序等方法需要昂贵的专业仪器，对操作人员及操作技术要求高，不利于临床应用。急需研制更高效、简便、实用的分子生物学检测技术。