[发明专利]一种大规模细胞培养的方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种大规模细胞培养的方法。本发明公开了一种大规模细胞培养的方法，该方法通过对细胞培养液进行灌流，并控制细胞培养液的灌流速度，使得细胞的营养物质得到连续补充，无需反复操作，可以一次性收获大量细胞，实现了细胞的高密度培养。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种大规模细胞培养的方法。

背景技术

生物医药产业的飞速发展，通过动物细胞在体外大规模培养来表达特定的蛋白、单克隆抗体、干扰素及病毒疫苗制品已成为当下应用最广泛的技术之一。目前用于细胞体外大规模培养主要通过大容量的细胞培养瓶、转瓶、多层细胞培养装置、生物反应器等装置通过多次转瓶培养实现，例如一个850毫升的细胞培养瓶，单次可以收获细胞10⁷个，一次治疗约需要细胞的数量为2×10⁹个，850ml细胞培养瓶需要反复多次培养200瓶左右，需要反复操作，耗时耗力，且培养过程均为静态培养，不能实时更新培养液，从而无法一次培养收获大量细胞。

发明内容

本发明提供了一种大规模细胞培养的方法，解决了现有的细胞体外大规模培养方法需多次转瓶，反复操作，且培养过程均为静态培养，不能实时更新培养液，从而无法一次培养收获大量细胞。

其具体技术方案如下：

本发明提供了一种大规模细胞培养的方法，包括以下步骤：

步骤1：向培养液收集瓶加入细胞培养液；

步骤2：将细胞通过进液管由进液室接种至动态细胞培养器的培养腔内，启动蠕动泵，将所述细胞培养液充满所述动态细胞培养器，关闭所述蠕动泵，进行静态孵育；

步骤3：启动所述蠕动泵，向所述静态孵育后的所述动态细胞培养器中持续灌注细胞培养液进行动态孵育；

步骤4：将步骤3所述动态孵育后的所述动态细胞培养器中的液体通过出液管排出，收集细胞；

步骤3所述蠕动泵的转速为0.1～3rpm。

需要说明的是，本申请大规模细胞培养的方法是基于公开号为CN109266548A的专利“一种动态细胞培养器及细胞培养系统”中的动态细胞培养器进行的。

本发明中，步骤1之前，还包括：根据动态细胞培养器培养腔的体积来确定步骤1中所需细胞培养液总体积(静态孵育和动态孵育)和步骤3中动态培养灌注所需细胞培养液的灌流体积。如表1所示，不同规格的动态细胞培养器加入的灌流体积不同。本发明在静态孵育和动态孵育过程中，细胞培养液需充满细胞培养器的培养腔。

本发明确定了所需细胞培养液体积后，还包括：确定所需细胞数量。

所述确定所需细胞数据包括两种方法：

1)与现有技术中同规格细胞工厂培养时所接种细胞数量一致。

2)细胞接种量＝X个/cm²×培养面积(cm²)。

本发明中，细胞的接种量为0.5～50×10⁷个。动态细胞培养器培养腔的层数不同，细胞的接种量也不同，具体参见表1。

表1 不同规格动态细胞培养器培养细胞参数参考值

确定所需细胞数量后，还包括：取生长良好的细胞，制备细胞悬液。

本发明中，所述细胞悬液的细胞活率为95％以上。

本发明制备细胞悬液后，进行细胞接种前准备操作：向培养液收集瓶中加入细胞培养液。