[发明专利]同时检测8种动物成分的引物、试剂盒及检测方法和应用有效

申请号：	202010151869.1	申请日：	2020-05-21
公开（公告）号：	CN111334585B	公开（公告）日：	2022-06-28
发明（设计）人：	朱丽萍;颜世敢;童奎杰	申请（专利权）人：	齐鲁工业大学
主分类号：	C12Q1/6888	分类号：	C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
代理公司：	暂无信息	代理人：	暂无信息
地址：	250353 山东***	国省代码：	山东;37
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摘要：
搜索关键词：	同时检测动物成分引物试剂盒方法应用
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【权利要求书】：

1.同时检测羊、牛、猪、鸡、鸭、兔、狐狸和貂8种动物成分的PCR检测方法，其特征在于，所述检测方法中使用如下引物：

(1)羊源特异引物：

Goat-F：CCACCAACTACCCACTTT，如SEQ ID NO:1所示；

Goat-R：TTGCGTCTGTTCGTCCAT，如SEQ ID NO:2所示；

(2)牛源特异引物：

Bovine-F：GCATCATTCTACCCACTTT，如SEQ ID NO:3所示；

Bovine-R：CGACTATTGTTGGTAGAAAAG，如SEQ ID NO:4所示；

(3)猪源特异引物：

Pig-F：TTGCCCTTCCATCATTAC，如SEQ ID NO:5所示；

Pig-R：CTGGGATAGCATCTGTTT，如SEQ ID NO:6所示；

(4)鸡源特异引物：

Chicken-F：GGATGATGACAAGGACGAG，如SEQ ID NO:7所示；

Chicken-R：TAGTAAGGTTATGCGGAGG，如SEQ ID NO:8所示；

(5)鸭源特异引物：

Duck-F：TAGTCATAGCAAGCCTCCA，如SEQ ID NO:9所示；

Duck-R：CGTGGTATTAGTTATGTGGG，如SEQ ID NO:10所示；

(6)狐狸源特异引物：

Fox-F：CCTAACTATCCAAACTCTCACC，如SEQ ID NO:11所示；

Fox-R：GGCCATGGTGATTATGAA，如SEQ ID NO:12所示；

(7)貂源特异引物：

Mink-F：CCTATCACCCTTTCACTTCTG，如SEQ ID NO:13所示；

Mink-R：AGTTAGTGCTGTTGCGTATG，如SEQ ID NO:14所示；

(8)兔源特异引物：

Rabbit-F：GGATGCTCAGGAGGTAGA，如SEQ ID NO:15所示；

Rabbit-R：CAGGTCTGATGTTGGGAT，如SEQ ID NO:16所示；

所述PCR检测方法中的反应体系为：10×PCR buffer 2.5μL，25mmol/L MgCl₂ 1.6μL,Taq DNA聚合酶3U，2.5mmol/L dNTPs 2.8μL，狐、羊、鸭的引物对的终浓度各为0.16μmol/L，兔、牛的引物对的终浓度各为0.2μmol/L，貂的引物对的终浓度为0.08μmol/L，猪的引物对的终浓度为0.48μmol/L，鸡的引物对的终浓度为0.56μmol/L，最后用去离子水定容至25uL。

2.根据权利要求1所述的PCR检测方法，所述PCR检测方法的反应程序和结果判断程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，55.6℃退火55s，72℃延伸90s，共40个循环，最后72℃延伸10min；取5μL PCR产物，与上样缓冲液混匀，在1.5％浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳，电泳结束，取出凝胶，置凝胶成像仪中，于紫外灯下观察条带大小，判定结果。

3.引物组在制备检测羊、牛、猪、鸡、鸭、兔、狐狸和貂8种动物成分的试剂盒中的应用，所述引物组包括以下引物：