[发明专利]一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.重组猪流行性腹泻病毒COE蛋白在检测重组猪流行性腹泻病毒抗体和/或制备检测重组猪流行性腹泻病毒抗体的试剂盒中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述COE蛋白的氨基酸序列如SEQ.ID.No.1所示，编码所述COE蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ.ID.No.2所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述COE蛋白的制备方法为：将编码所述COE蛋白的基因克隆至真核表达载体pPIC9K中，将获得的重组表达质粒pPIC9K-COE转化入毕赤酵母GS115感受态细胞进行诱导表达，即得所述COE蛋白。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测的方法为ELISA法。

5.一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法，其特征在于，以重组猪流行性腹泻病毒COE蛋白为包被抗原，利用ELISA法进行检测。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.以重组猪流行性腹泻病毒COE蛋白为包被抗原用包被液包被酶标板，并封闭微孔表面未吸附位点；

S2.将待测猪血清稀释后加入酶标板的孔中，同时设置空白对照孔、阴性对照孔和阳性对照孔，待测猪血清中的抗体与酶标板中的包被抗原进行反应，洗去反应后未结合的物质；

S3.加入酶标二抗反应，洗去反应后未结合的酶标二抗，然后加入底物显色液进行显色后，用终止液终止反应，根据测得的OD₄₅₀值计算阴阳性临界值；

S4.当阴阳性临界值≥0.12时，则待测猪血清为猪流行性腹泻病毒抗体阳性；当阴阳性临界值＜0.12，则待测猪血清为猪流行性腹泻病毒抗体阴性。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤S1所述包被液为0.05M Tris，所述重组猪流行性腹泻病毒COE蛋白包被的浓度为1μg/mL，包被的条件为4℃包被11～13h。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤S2所述稀释的倍数为400倍，所述反应的条件为36～38℃反应40～50min；步骤S3所述酶标二抗反应条件为36～38℃反应25～35min。

9.一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括由重组猪流行性腹泻病毒COE蛋白包被的酶标板。

10.权利要求5～8任一所述方法或权利要求9所述试剂盒在检测重组猪流行性腹泻病毒抗体中的应用。