[发明专利]鳐鱼硫酸软骨素的降解产物及其降解方法

说明书

本发明公开了一种鳐鱼硫酸软骨素降解产物及降解方法，由鳐鱼硫酸软骨素降解得来。所述鳐鱼硫酸软骨素降解产物的分子量为5000‑8400。所述鳐鱼硫酸软骨素降解产物硫酸根含量为17.26％。本发明采用硫酸软骨素酶进行酶解，LMWCS得率高达72％、外观质量好、分子量低至5009，多分散系数最低，纯度达到99％，且仍保持了与降解前相同的硫酸根含量；硫酸软骨素酶选择性裂解GalNAc4S残基，使CS‑A二糖含量的提高；LMWCS较降解前的鳐鱼CS具有更强的抗氧化能力。

技术领域

本发明涉及生物活性物质技术领域，具体涉及鳐鱼硫酸软骨素的降解产物及其降解方法。

背景技术

硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate，CS)普遍存在于动物的软骨及结缔组织的胞外基质中和细胞表面，同时也是哺乳动物血液和血管中的重要组成部分。CS具有蛋白链接域，其通过四糖连接域(GlcAβ1→3GalNAcβ1→3GalNAcβ1→4Xylβ1-O-Ser)共价连接到甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸序列中的丝氨酸残基上，从而与核心蛋白相连接，以聚集的蛋白聚糖糖链的形式存在。目前工业生产的CS大多来源于猪、牛、鸡这类陆生动物和一些水生动物如鲨鱼、鲟鱼、鱿鱼的软骨组织，CS可占其干重的20％-50％。CS种类与含量随着动物来源的种类、部位、年龄等因素而表现出明显的差异，如牛气管中含36％左右，在猪软骨中一般为40％，而鱼类软骨中的CS含量较高，可达50％以上，成为提取CS的重要来源。

作为生物体组织内自身合成和天然存在的成分，参与着众多的生理活动，如生长因子的信号传导、神经细胞的生长、肿瘤细胞的迁移等。虽然CS的主链结构较为简单，但其二糖的组成和排列顺序、分子量的大小以及硫酸基取代的位点和程度造成了其具有高度的不均一性。正是由于CS极为复杂的精细结构，赋予了其丰富多样的理化性质和生物活性，能够在调节关节机能、清除自由基、抗凝血、抗肿瘤等方面发挥重要的生理功效，可作为生物药物对关节炎、动脉粥样硬化、冠心病、肿瘤起到辅助治疗的作用。

我处制备的鳐鱼硫酸软骨素鳐鱼的特征性成分为4-单硫酸化二糖CS-A、6-单硫酸化二糖CS-C和2,6-二硫酸化二糖CS-D，与鲨鱼软骨素结构类似，但在A/C(CS-A/CS-C含量比)方面具有差异，鳐鱼CS不仅具有作为良好的鲨鱼CS替代物的潜力，还因其突出的特征而表现出与鲨鱼CS不同的生理活性与功能。多糖的相对分子质量是其重要的化学性质之一，对其生物功能和生理活性的发挥起到关键性的影响。天然CS的相对分子质量范围一般在40000-100000之间，采用不同降解方法得到的CS的分子量一般在500-30000之间，低于10000时，则可称为低分子量硫酸软骨素(LMWCS)。由于LMWCS具有易吸收，生物利用度高，且多数生物活性得到增强的特点，近些年来受到了越来越多的关注。与此相对应的，关于采用不同降解方法制备LMWCS的研究也陆续出现，其降解方法一般可分为物理降解法、化学降解法和生物降解法，但采用不同降解方法得到的LMWCS的分子量差异较大，降解产物的得率、质量也参差不齐，为LMWCS的研究带来了一定的难度和不确定性。但不同来源的CS降解酶的降解机理可能并不相同，张莲等人通过动物来源的透明质酸酶对CS进行降解，得到的LMWCS为饱和寡糖，而Yin等人从细菌中分离得到的硫酸软骨素AC裂解酶对CS进行降解后，得到的为不饱和寡糖，这说明采用生物酶对CS进行降解，得到的LMWCS的结构可能会发生未知的变化，其生物活性也可能随之改变。CS的来源不同，降解方式的差异，都会对制备出的LMWCS的理化性质和结构造成不同的影响。

发明内容

本发明旨在解决上述问题，提供鳐鱼硫酸软骨素的降解产物及其降解方法。

为达到上述目的，采用如下技术方案：

一种硫酸软骨素降解产物，其是鳐鱼硫酸软骨素降解得来。所述鳐鱼硫酸软骨素降解产物的分子量为5000-8400。所述鳐鱼硫酸软骨素降解产物硫酸根含量为17.26％。

一种鳐鱼硫酸软骨素的降解方法，按照如下步骤进行：