[发明专利]一种用于高密度培养山羊支原体山羊肺炎亚种的培养基及其发酵培养方法

说明书

本发明公开了一种用于高密度培养山羊支原体山羊肺炎亚种的培养基及其发酵培养方法。所述山羊支原体山羊肺炎亚种由临床诊断为患支原体性肺炎的山羊呼吸道分泌物中分离得到，已于2019年12月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18878。所述发酵培养方法为将经过复苏传代后的山羊支原体山羊肺炎亚种ZFY17 CGMCC No.18878在特定发酵培养基及特定条件下进行液体发酵培养。所述特定发酵培养基采用葡萄糖、水解酵母蛋白、水解酵母培养物、水解乳蛋白、酪蛋白的组合替代部分马血清，大大降低了菌株发酵成本。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于高密度培养山羊支原体山羊肺炎亚种的培养基及其发酵培养方法。

背景技术

山羊传染性胸膜肺炎是山羊养殖中常见的急性或慢性高度接触性呼吸道传染病，以纤维素性胸膜炎为主要特征，被感染羊群无年龄和性别差异，发病率和死亡率都很高。现广泛流行于非洲和亚洲养羊国家，危害极大，被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物传染病之一，1873年首次发现于阿尔及利亚，迄今为止全球已有40多个国家和地区曾有该病发生的报道，我国于2010年首次向OIE通报此病，该病每年都会造成巨大的经济损失。山羊传染性胸膜肺炎是由山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasmacapricolumsubsp.Capripneumonia，Mccp)引起，由于临床上支原体的分离与培养十分困难，非专业实验室无法做到，且临床上又常可能被其它呼吸道疾病干扰而最终不能确认，致使羊场技术人员及基层兽医基本上只能凭经验用药，而无法针对病原支原体进行科学合理用药。

山羊传染性胸膜肺炎病原的分离与鉴定是一个难题，到目前为止，分离到病原是证实山羊传染性胸膜肺炎发生的唯一办法。然而分离山羊支原体肺炎亚种是一个漫长而艰难的过程，进行体外培养也较难，其对营养要求和培养条件比较苛刻，在很大程度上阻碍了对其的分离培养。除此之外，山羊支原体山羊肺炎亚种的基因组很小，其生物合成能力较低，生长需要外源性胆固醇、核酸前体、维生素等等，要想找到既便宜又能高密度培养该支原体的培养基组成需要很大的工作量去尝试、去筛选。因此，选择适宜的培养基及发酵条件是亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种既便宜又能高密度培养山羊支原体山羊肺炎亚种的培养基及其发酵培养方法。

为了实现上述目的，本发明首先提供了一种用于培养山羊支原体山羊肺炎亚种的培养基。

本发明提供的用于培养山羊支原体山羊肺炎亚种的培养基为如下1)或2)或3)：

1)所述培养基的溶质包括灭活马血清、25％(质量分数)酵母浸液、10％(质量分数)醋酸铊、青霉素、酚红、PPLO肉汤、丙酮酸钠和葡萄糖；

2)所述培养基的溶质包括灭活马血清、25％(质量分数)酵母浸液、10％(质量分数)醋酸铊、青霉素、酚红、PPLO肉汤、丙酮酸钠、葡萄糖和水解乳蛋白；

3)所述培养基的溶质包括灭活马血清、25％(质量分数)酵母浸液、10％(质量分数)醋酸铊、青霉素、酚红、PPLO肉汤、丙酮酸钠、葡萄糖、水解乳蛋白、水解酵母蛋白、水解酵母培养物和酪蛋白。

上述1)中所述的用于培养山羊支原体山羊肺炎亚种的培养基中，

所述灭活马血清在所述培养基中的体积分数可为8-20％；进一步的，所述灭活马血清在所述培养基中的体积分数可为8-10％或10-20％；更进一步的，所述灭活马血清在所述培养基中的体积分数可为8％或10％或20％。

所述25％酵母浸液在所述培养基中的体积分数可为8-12％；进一步的，所述25％酵母浸液在所述培养基中的体积分数可为8-10％或10-12％；更进一步的，所述25％酵母浸液在所述培养基中的体积分数可为8％或10％或12％。