[发明专利]一种评估干细胞免疫调控功能的方法

说明书

本发明提供一种定量评估干细胞免疫调控功能的方法，其包括：分选接受干细胞制剂的受试体的效应细胞，采用抗体包被的扩增磁珠进行标准化的效应细胞扩增，基于CFSE染色标记效应细胞、流式细胞术评估在待检测干细胞单细胞混悬液内混合培养的效应细胞的增殖，以效应细胞增殖被抑制率评估待检测干细胞免疫调控功能。本发明的方法可靠、重复性好，可作为全面综合反映干细胞质量的必要内容，可以作为科研领域评价干细胞免疫调控能力以及临床应用领域对临床输注级干细胞制剂免疫调控能力的评定和质量控制。

技术领域

本发明涉及医疗领域，具体涉及一种评估干细胞免疫调控功能的方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

干细胞是一类具有自我更新/多向分化潜能和独特免疫调控功能的细胞，以干细胞为代表的细胞治疗突破药物、手术两种传统治疗方式，已成为生物医学领域最前沿、最有前景的疾病干预策略。当前全球各国已批准上市了十余款干细胞产品，以间充质干细胞为主，而国内目前尚无干细胞产品上市，但是为了保障正规、有序、安全、健康的细胞治疗产业前景，国家制定一系列政策法规，推动干细胞治疗的临床进展，主要从干细胞临床研究备案项目和干细胞新药临床研究两个方向进行。截止到2019年年底，国家批准干细胞临床治疗研究的医疗机构增至118家(包括12家军队系统医院)，备案项目增至62个。监管政策的完善落地将规范干细胞治疗的临床转化，并指引该领域的发展方向。

除自我更新和多向分化潜能之外，干细胞具有独特的免疫学特性，并展示出独特的免疫调控功能。目前干细胞已被用于治疗多种类型的免疫异常如自身免疫反应、炎症失控所致的疾病，如1型糖尿病、系统性红斑狼疮(SLE)、急慢性移植物抗宿主反应(GVHD)等。此外，科研人员正在积极推进包括恢复期血浆、干细胞等在重症治疗方面的临床疗效的研究探索，并且干细胞免疫调控能力在助力新型冠状病毒阻击战中也被寄予厚望，尤其有望在预防、改善重症“炎症瀑布反应”及肺纤维化方面具有其他治疗都无法替代的优势。当前，国内外大量临床前研究已经验证了干细胞治疗自身免疫疾病的有效性和安全性，并有不少研究进入II-III期临床试验阶段。近年来，国际上逐步将干细胞的免疫调控功能当作干细胞作为治疗产品的关键有效性属性，并形成共识、提出了一些建设性意见，如国际细胞治疗协会(International Society of Cell Therapy，ISCT)于2013年建议针对干细胞的各项免疫调控功能建立一套可靠的、重复性好的标准化检测技术，用于评价干细胞作为治疗产品的质量。而我国在《干细胞临床研究管理办法》出台的《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则》中也明确提出“免疫调控功能作为干细胞生物学有效性的质量评价内容”。

然而，发明人发现，当前国内外针对干细胞制剂的质量检验一般只涉及一般生物学属性(数量、活性、增殖能力等)、微生物安全性(细菌、病毒、真菌和内毒性检测等)、生物学安全性(抗原性、致瘤性等检测)，针对细胞制剂的生物学有效性的质量检测手段相对缺乏，目前也更多集中在表明分子标记物、诱导分化功能检测，尚缺少免疫调控性能这一关键的细胞生物学性能评价。尤其是针对用于糖尿病、自身免疫性疾病(如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等)及急慢性炎症性疾病(如新型冠状病毒COVID-19、SARS冠状病毒、埃博拉病毒或者H7N9流感病毒等感染引起的全身炎症反应SIRS)等，免疫调控性能，而不是定向分化能力，才是干细胞最重要的治疗机制。对于用于这部分疾病治疗的细胞制剂，科学客观地评估其免疫调控性能至为重要。

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种评估干细胞免疫调控功能的标准化方案。本方法基于混合淋巴细胞反应的基本原理，能够评价干细胞对总淋巴细胞增殖的抑制能力，作为干细胞免疫调控功能的基本性能评估；也能进一步评估干细胞对CD4⁺T淋巴细胞亚群增殖分化的调控效能，以及干细胞对不同免疫细胞释放炎症因子等方面的调控能力。本发明所述方法是一种可靠、重复性好的标准化检测方法，可作为全面综合反映干细胞质量的必要内容，能够反映干细胞制剂的生物学有效性。