[发明专利]卵子及卵裂期胚胎的玻璃化解冻液及解冻方法有效
| 申请号： | 202010157422.5 | 申请日： | 2020-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN111226909B | 公开（公告）日： | 2022-03-25 |
| 发明（设计）人： | 曾玉洁;胡威;姜永存;赵衡斌;陈烨;周星宇;吴秀芝;吴文林 | 申请（专利权）人： | 佛山辅康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 广州广典知识产权代理事务所(普通合伙) 44365 | 代理人： | 万志香 |
| 地址： | 528300 广东省佛山市顺德区陈村镇赤花社区广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 卵子 卵裂 胚胎 玻璃化 解冻 方法 | ||
1.一种卵子及卵裂期胚胎的玻璃化解冻液，其特征在于，包括平衡液、解冻液1、解冻液2和解冻液3；
所述平衡液包括M199培养液和血清替代物；所述平衡液中血清替代物的体积分数为10％～30％，
所述解冻液1、解冻液2和解冻液3中均包括M199培养液、血清替代物和海藻糖；
所述解冻液1中血清替代物的体积分数为18％～22％，海藻糖的摩尔浓度为0.9～1.1mol/L；
所述解冻液2中血清替代物的体积分数为18％～22％，海藻糖的摩尔浓度为0.45～0.55mol/L；
所述解冻液3中血清替代物的体积分数为18％～22％，海藻糖的摩尔浓度为0.22～0.27mol/L；
所述M199培养液为HEPES改良型199培养液。
2.根据权利要求1所述的玻璃化解冻液，其特征在于，
所述解冻液1中血清替代物的体积分数为18％～22％，海藻糖的摩尔浓度为1mol/L；
所述解冻液2中血清替代物的体积分数为18％～22％，海藻糖的摩尔浓度为0.5mol/L；
所述解冻液3中血清替代物的体积分数为18％～22％，海藻糖的摩尔浓度为0.25mol/L。
3.一种卵子或卵裂期胚胎的解冻方法，其特征在于，使用权利要求1～2任一项所述的玻璃化解冻液对卵子或卵裂期胚胎进行解冻。
4.根据权利要求3所述的解冻方法，其特征在于，包括以下步骤：将卵子或卵裂期胚胎从冷冻环境中拿出，35～40℃下用所述解冻液1作用1～5min，再在室温条件下依次用所述解冻液2作用1～6min、所述解冻液3作用1～6min和所述平衡液作用1～6min，再将所得含有平衡液的卵子或卵裂期胚胎在35～40℃下平衡作用3～10min。
5.根据权利要求4所述的解冻方法，其特征在于，包括以下步骤：将卵子或卵裂期胚胎从冷冻环境中拿出，35～40℃下用所述解冻液1作用1～3min，再在室温条件下依次用所述解冻液2作用2～4min、所述解冻液3作用2～4min和所述平衡液作用2～4min，再将所得含有平衡液的卵子或卵裂期胚胎在35～40℃下平衡作用5～8min。
6.根据权利要求3～5任一项所述的解冻方法，其特征在于，所述室温为22～28℃。
7.根据权利要求6所述的解冻方法，其特征在于，所述室温为26℃。
8.根据权利要求3～5任一项所述的解冻方法，其特征在于，所述的卵子或卵裂期胚胎为人或者非人哺乳动物的卵子或卵裂期胚胎。
9.根据权利要求8所述的解冻方法，其特征在于，所述非人哺乳动物为牛、羊、兔子或小鼠。
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