[发明专利]一种支原体鉴定琼脂培养基及其制备方法

说明书

本发明提供一种成分简单、增大菌落效果好且灵敏度高的支原体鉴定琼脂培养基以及其制备方法。本发明所述培养基按质量百分比计算，该培养基包括以下成分：基础培养基5.2～9.4％，添加剂0.309～0.645％，血清5.0～9.0％，余量为纯化水，其中，所述添加剂内包含有CaCl₂，所述CaCl₂在培养基中的占比为0.04～0.06％；所述培养基的制备方法包括以下步骤：（1）基础培养基的制备；（2）添加剂的制备；（3）培养基的配制；（4）固体培养基制备。本发明用于培养基领域。

技术领域

本发明涉及培养基领域，尤其涉及一种用于解脲支原体的支原体鉴定琼脂培养基，以及利用该培养基对支原体进行培养鉴定的方法。

背景技术

支原体（Mycoplasma）归属于柔膜体纲，支原体目（Mycoplasmatales），支原体科，是一群大小介于细菌与病毒之问的病原体，是机会致病菌。支原体在泌尿生殖道存在定植现象，人群中存在着相当数量的支原体携带者而没有症状和体征，以Uu最为突出。

培养法是目前国内医疗机构进行解脲支原体和人型支原体检测的主要手段，而且主要是使用液体培养基直接检测并同时进行支原体药敏试验，已经沿用近20年，但在临床中已暴露出很多缺陷，如假阳性率高、假阴性、以及污染干扰严重等。液体培养法易受到细菌或真菌的污染导致假阳性，因此需要固体培养基确认菌落形态才能最后诊断。

固体琼脂法可以观察支原体特征性的菌落，如“海胆型”或“油煎蛋样”菌落是微生物学诊断的金标准，但是解脲支原体在固体培养基中菌落极其小，难以观察。Uu在生长过程中产生尿素酶是其最重要的一个生理特征，尿素酶可以和多种金属离子发生氧化，生成不透明的氧化物。传统支原体琼脂培养基采用硫酸锰增大解脲支原体菌落的大小便于观察，但是硫酸锰对支原体具有一定的毒性，在增大菌落的同时会抑制支原体的生产。

为了解决支原体在固体琼脂上菌落小，难以观察的难题，国内外专家学者进行了大量的研究。现在市面上的固体琼脂培养基均以A7鉴别琼脂（A7 Differential Agar）发展改进而来，选用硫酸锰增大支原体菌落的大小，以便进行观察。但正如上所述，由于硫酸锰对支原体生长的抑制作用，导致这类固体琼脂培养基的灵敏度非常的低，达不到支原体检测的要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足,提供一种成分简单、增大菌落效果好且灵敏度高的支原体鉴定琼脂培养基，以及该培养基的制备方法，该方法步骤简单，易于实现，大大地降低了成本。

本发明所述支原体鉴定琼脂培养基所采用的技术方案是：按质量百分比计算，该培养基包括以下成分：基础培养基5.2～9.4％，添加剂0.309～0.645％，血清5.0～9.0％，余量为纯化水，其中，所述添加剂内包含有CaCl₂，所述CaCl₂在培养基中的占比为0.04～0.06％。

进一步地，按在培养基中的质量百分占比计算，所述基础培养基包括以下组分：琼脂粉1.0～1.5％，胰酪胨1.0～1.5％，大豆胨0.3～0.6％，葡萄糖0.3～0.6％，磷酸氢二钾0.3～0.6％，氯化钠0.3～0.6％，酵母提取液2.0～4.0％。

再进一步地，按在培养基中的质量百分占比计算，所述添加剂还包括以下组分：尿素0.12～0.26％，精氨酸0.12～0.26％，酚红0.02～0.05％，青霉素钾0.003～0.005％，氨苄西林钠0.003～0.005％，两性霉素0.003～0.005％。