[发明专利]卵子或卵裂期胚胎的玻璃化冷冻液及冷冻方法有效
申请号: | 202010157999.6 | 申请日: | 2020-03-09 |
公开(公告)号: | CN111226910B | 公开(公告)日: | 2022-03-25 |
发明(设计)人: | 胡威;姜永存;曾玉洁;赵衡斌;陈烨;周星宇;吴秀芝;吴文林 | 申请(专利权)人: | 佛山辅康生物科技有限公司 |
主分类号: | A01N1/02 | 分类号: | A01N1/02 |
代理公司: | 广州广典知识产权代理事务所(普通合伙) 44365 | 代理人: | 万志香 |
地址: | 528300 广东省佛山市顺德区陈村镇赤花社区广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 卵子 卵裂 胚胎 玻璃化 冷冻 方法 | ||
1.一种卵子的玻璃化冷冻液,其特征在于,包括基础液、预保护液和保护液;
所述基础液包括M199培养液和血清替代物;所述基础液和血清替代物的体积比为90~110:15~30;
所述预保护液包括M199培养液、血清替代物、乙二醇、二甲亚砜和丙二醇;所述预保护液、血清替代物、乙二醇、二甲亚砜和丙二醇的体积比为100:19~21:7~8:3.5~4:3.5~4;
所述保护液包括M199培养液、血清替代物、乙二醇、二甲亚砜、丙二醇和海藻糖;所述保护液、血清替代物、乙二醇、二甲亚砜和丙二醇的体积比为100:19~21:14~16:7~8:7~8;所述海藻糖在所述保护液中的摩尔浓度为0.4~0.6mol/ L 。
2.根据权利要求1所述的玻璃化冷冻液,其特征在于,
所述基础液和血清替代物的体积比为100:15~30。
3.根据权利要求2所述的玻璃化冷冻液,其特征在于,
所述基础液和血清替代物的体积比为100:19~21。
4.根据权利要求1~3任一项所述的玻璃化冷冻液,其特征在于,所述M199培养液为HEPES改良型199培养液。
5.一种卵子的冷冻方法,其特征在于,使用权利要求1~4任一项所述的玻璃化冷冻液对卵子进行冷冻。
6.根据权利要求5所述的冷冻方法,其特征在于,包括以下步骤:
将卵子依次经所述基础液洗5秒~40秒、所述预保护液作用4分钟~12分钟和所述保护液作用1分钟~3分钟。
7.根据权利要求6所述的冷冻方法,其特征在于,卵子的冷冻方法包括以下步骤:将卵子依次经所述基础液洗5秒~10秒、所述预保护液作用7分钟~9分钟和所述保护液作用1分钟~3分钟。
8.根据权利要求5~7任一项所述的冷冻方法,其特征在于,液体置换的步骤在超净台上操作;所述操作的温度为22~28℃。
9.根据权利要求5~7任一项所述的冷冻方法,其特征在于,所述卵子为非人哺乳动物的卵子;所述非人哺乳动物为牛、羊、兔子或小鼠。
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