[发明专利]一种从金钗石斛中提取化合物的工艺及应用

说明书

本发明提供一种从金钗石斛中提取化合物的工艺，A)将金钗石斛粉碎，用乙醇水溶液浸提，浸提液合并浓缩，得到浸膏A；B)将所述浸膏A与水混合，乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩制成浸膏B；C)取浸膏B，过减压柱，经梯度洗脱，获得16个流分；D)将流分13过反相柱，进行梯度洗脱，得到14个流分；E)第7流分过葡聚糖凝胶柱，以甲醇和氯仿的混合液进行洗脱，得到18个流分，合并第15～17流分，经半制备HPLC纯化，得到式I和式II所示化合物。本发明研究表明式I和II所示的化合物能够抑制α‑葡萄糖苷酶的活性和抑制NO的产生，体现抗炎活性。表明该化合物能够用于制备治疗和/或预防糖尿病和炎症的食品以及药品。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种从金钗石斛中提取化合物的工 艺及应用。

背景技术

近年来，随着人们生活水平的提高，糖尿病的患病率也在逐年增加，据 2017年国际糖尿病联盟(IDF)发布的数据显示，全世界约有4.25亿人(20-79 岁)患有糖尿病，其中中国有1.14亿，位居世界第一，根据这一趋势，到2045 年，全球将有6.29亿人是糖尿病患者。此外，糖尿病的发病率高达12％，并且 在逐渐趋于年轻化。糖尿病(Diabetes mellitus，DM)是一种多种因素和病因 造成的代谢紊乱疾病，它的特征在于慢性的高血糖症。其发病与饮食、遗传、 环境因素和免疫系统功能紊乱等有密切关系。糖尿病主要分为三类，I型、II型和妊娠糖尿病，其中II型患者占总糖尿人数的90％以上，但目前对其发生 发展的精确分子机制尚不完全清楚。近几年，积累的诸多临床实验证据揭示 II型糖尿病的发病机制与肥胖及炎症所引起的胰岛素抵抗有关。

炎症是机体、细胞对外界物理、化学和生物等有害刺激做出的一系列免 疫应答反应，反应的常见表现有发热、红肿、疼痛以及功能障碍等。一般来 说，炎症是组织器官对损伤或者感染做出的防御反应，对机体是有益的，但 是长期的炎症反应会诱导机体产生过激的异常反应，甚至会诱发许多疾病， 如糖尿病、动脉粥样硬化、老年痴呆症、癌症等。目前临床上常使用甾体激 素和非甾体类(阿司匹林、双氯芬酸和布洛芬等)治疗炎症，人体服用后会 产生一系列的毒副作用，如肝脏和胃肠道损伤以及心血管系统损伤等。此外， 植物源药物药效缓慢温和、持久性强，毒副作用小且不易产生机体耐受，因 此有必要从植物中寻找具有降血糖和抗炎活性的物质，为新型糖尿病和炎症 药物的研发提供先导化合物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从金钗石斛中提取化合物的工艺及应用，本 发明中的工艺从药用植物金钗石斛的茎中提取得到式I和II化合物，能有效抑 制血糖水平关键酶的活性，以LPS诱导RAW264.7产生NO为模型进行抗炎活性 评价，I和II所示的化合物能够抑制NO的产生，体现抗炎活性。

本发明提供一种从金钗石斛中提取化合物的工艺，包括以下步骤：

A)将金钗石斛粉碎，用1～3倍体积的乙醇水溶液浸提2～5次，所得浸提液 过滤后合并浓缩，得到浸膏A；

B)将所述浸膏A与水制备成混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇 进行萃取，筛选三种萃取液后，将乙酸乙酯萃取液浓缩制成浸膏B；

C)取浸膏B，过减压柱，经石油醚和乙酸乙酯混合洗液梯度洗脱，然后 用丙酮冲柱，收集流分，将所得各个流分浓缩合并，最终获得16个流分，记 为Fr.1～Fr.16；

D)将流分Fr.13过反相柱，以30～100％的甲醇水溶液进行梯度洗脱，得到 14个流分，记为Fr.13-1～Fr.13-14；

E)取流分Fr.13-7过葡聚糖凝胶柱，以甲醇和氯仿的混合液进行洗脱，得 到18个流分，记为Fr.13-7-1～Fr.13-7-18，合并Fr.13-7-15～Fr.13-7-17流分，经 半制备HPLC纯化，在t_R＝13.5min得到式I所示化合物，在t_R＝16.4min得到式II 所示化合物；