[发明专利]一种新型冠状病毒SARS-CoV-2 S蛋白检测方法

权利要求书

1.一种新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将血管紧张素转换酶2ACE2重组蛋白用生物素酯标记后包被于链霉亲和素磁珠；

S2、将ACE2活化后与活化的碱性磷酸酶ALP混匀反应，制备碱性磷酸酶ALP标记的ACE2；

S3、将步骤1、2中的试剂与待测样本混匀后孵育；

S4、洗涤，将未被结合的酶结合物以及其它物质去除；

S5、加入发光底物AMPPD，酶结合物催化发光底物发射光子，通过光子数判断待测物中是否存在SARS-CoV-2S蛋白。

2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，所述S1具体为：将血管紧张素转换酶2ACE2重组蛋白与生物素酯标记试剂NHS-LC-Biotin按1:20(mol/mol)比例室温混匀反应30min，将生物素标记的ACE2重组蛋白与链霉亲和素磁珠按5μg/mg混匀室温反应30min制备ACE2重组蛋白包被磁微粒。

3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，所述S2中活化的碱性磷酸酶ALP制备过程为：将(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯SMCC和碱性磷酸酶ALP按1:38(w/w)比例室温混匀30min制备活化碱性磷酸酶ALP。

4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，所述S2中ACE2活化过程为：将2-亚氨基硫烷盐酸盐2-IT和ACE2重组蛋白按1:12(w/w)比例室温混匀30min制备活化ACE2重组蛋白。

5.根据权利要求1或3或4任一项所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，所述S2中ALP标记的ACE2制备过程为：将活化的碱性磷酸酶与活化的ACE2重组蛋白按1:1.2(w/w)比例室温混匀2h，制备碱性磷酸酶ALP标记的ACE2重组蛋白。

6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，所述S3具体为：取10μL待测样本于反应管中，加入50μL ACE2重组蛋白包被磁微粒，加入50μL碱性磷酸酶ALP标记的ACE2重组蛋白，混匀后37℃反应20min。

7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法，其特征在于，所述S3具体为：加入发光底物AMPPD，酶结合物催化发光底物发射光子，光子的数量与样本中S蛋白的浓度成正比；将SARS-CoV-2重组S蛋白梯度稀释作为检测系统校准品，通过浓度-相对发光值(RLU)的校准曲线，计算出样本中S蛋白的浓度。

8.一种使用权利要求1-7任一项所述的新型冠状病毒SARS-CoV-2S蛋白检测方法的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：生物素酯标记的ACE2重组蛋白包被的磁微粒、碱性磷酸酶ALP标记的ACE2重组蛋白和发光底物AMPPD。