[发明专利]一种新型冠状病毒SARS-CoV-2 S蛋白检测方法

说明书

本发明公开了一种新型冠状病毒SARS‑CoV‑2 S蛋白检测方法,利用SARS‑CoV‑2病毒依赖表面的spike蛋白与细胞表面的血管紧张素转换酶2结合得以进入细胞，该方法使用到化学发光免疫分析中常用的原材料，与ACE2都容易从市面采购，且生物素标记和碱性磷酸酶标记快速，可以快速制备用于检测SARS‑CoV‑2 S蛋白的试剂，该方法与SARS‑CoV‑2荧光定量PCR结果做比对，阳性符合率、阴性符合率和总符合率都较高。

技术领域

本发明涉及病毒检测方法，具体涉及一种新型冠状病毒SARS-CoV-2 S蛋白检测方法。

背景技术

病毒抗原检测免疫学分析方法通常采用双抗体夹心法，以检测SARS-CoV N蛋白抗原为 例，固相端为SARS-CoV N蛋白特异性抗体，标记端为SARS-CoV N蛋白特异性抗体，加入 待测物后孵育，待测物中的SARS-CoV N蛋白与固相端SARS-CoV N蛋白特异性抗体结合形 成免疫复合物，同时标记端的SARS-CoV N蛋白特异性抗体与样本中SARS-CoV N蛋白上的 不同抗原位点结合，形成标记后的免疫复合物，通过洗涤，将未被结合的酶结合物以及其它 物质去除。通过显色或者发光等方式对标记物进行检测，可以判断待测物中是否含有SARS-CoV N蛋白。

该方法检测抗原的关键是要制备针对抗原的特异性抗体。无论是制备单抗隆抗体还是多 克隆抗体，都需要通过基因工程重组表达抗原，然后免疫动物制备抗体，制备出抗体还需要 筛选出亲和力高的用于检测。要完成这一系列工作，通常会花费很多时间、物力、人力。传 统的双抗体夹心法一些固有的缺点，SARS-CoV-2病毒自爆发以来还未出现检测抗原的试剂。

发明内容

本发明提供了一种新型冠状病毒SARS-CoV-2 S蛋白检测方法，解决了现有技术无法有 效检测新型冠状病毒SARS-CoV-2 S蛋白问题。

为了解决该技术问题，本发明提供了如下技术方案：

一种新型冠状病毒SARS-CoV-2 S蛋白检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将血管紧张素转换酶2ACE2重组蛋白用生物素酯标记后包被于链霉亲和素磁珠；

S2、将ACE2活化后与活化的碱性磷酸酶ALP混匀反应，制备碱性磷酸酶ALP标记的ACE2；

S3、将步骤1、2中的试剂与待测样本混匀后孵育；

S4、洗涤，将未被结合的酶结合物以及其它物质去除；

S5、加入发光底物AMPPD，酶结合物催化发光底物发射光子，通过光子数判断待测物 中是否存在SARS-CoV-2 S蛋白。

优选的，所述S1具体为：将血管紧张素转换酶2ACE2重组蛋白与生物素酯标记试剂NHS-LC-Biotin按1:20(mol/mol)比例室温混匀反应30min，将生物素标记的ACE2重组蛋白与 链霉亲和素磁珠按5μg/mg混匀室温反应30min制备ACE2重组蛋白包被磁微粒。

优选的，所述S2中活化的碱性磷酸酶ALP制备过程为：将(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯SMCC和碱性磷酸酶ALP按1:38(w/w)比例室温混匀30min制备活化碱性磷酸酶ALP。

优选的，所述S2中ACE2活化过程为：将2-亚氨基硫烷盐酸盐2-IT和ACE2重组蛋白按1:12(w/w)比例室温混匀30min制备活化ACE2重组蛋白。

优选的，所述S2中ALP标记的ACE2制备过程为：将活化的碱性磷酸酶与活化的ACE2重组蛋白按1:1.2(w/w)比例室温混匀2h，制备碱性磷酸酶ALP标记的ACE2重组蛋白。