[发明专利]用于检测黄热病毒的RT-LAMP试剂盒及其专用引物

权利要求书

1.一种用于检测黄热病毒的RT-LAMP试剂盒，其特征在于，包含用于检测黄热病毒的RT-LAMP引物组，其为序列表中SEQ ID NO:14所示的引物F3、SEQ ID NO:15所示的引物B3、SEQ ID NO:16所示的引物FIP和SEQ ID NO:17所示的引物BIP；

所述RT-LAMP试剂盒中还包含基础反应试剂，所述基础反应试剂包括：10×ThermopolReaction Buffer、100mM MgSO₄、5 mM betaine、10mM dNTP，Bst DNA polymerase和WarmStart RTx reverse transcriptase；

所述试剂盒中还包含用于检测黄热病毒的说明书，其包括以下步骤：

S1：提取待测样品RNA；

S2：反应体系配制：25μL反应体系包含待测样品RNA 2μL、10×Thermopol ReactionBuffer 2.5μl、100mM MgSO₄ 1.5μl、5 mM betaine 4μl、10mM dNTP 3.5μl，Bst DNApolymerase 1μl，WarmStart RTx reverse transcriptase 0.5μl，引物加入量为：100µMFIP/BIP引物各0.8μl，100µM F3/B3所示引物各0.1μl，ddH₂O补至25μl；

S3：将反应体系置64℃-65℃条件下恒温扩增反应45-60min，获得反应液；

S4：结果分析：使用钙黄绿素颜色指示剂或浊度仪对所述反应液进行检测分析；

步骤S4中所述结果分析的方法为：当使用钙黄绿素颜色指示剂进行检测时，向所述反应液中添加1µl的钙黄绿素颜色指示剂，呈现绿色表示待测样品中存在黄热病毒，呈现橙色表示待测样品中不存在黄热病毒；当使用浊度仪进行检测时，所述反应液的浊度相对于扩增反应之前的反应体系的浊度上升表示待测样品中存在黄热病毒，浊度无变化表示待测样品中不存在黄热病毒。

2.根据权利要求1所述的RT-LAMP试剂盒，其特征在于，所述RT-LAMP试剂盒还包含阳性对照和阴性对照，所述阳性对照包含黄热病毒基因组RNA，所述阴性对照为不含黄热病毒基因组RNA的反应体系。

3.一种用于检测黄热病毒的非疾病诊断目的方法，该方法采用权利要求1或2所述的RT-LAMP试剂盒检测黄热病毒，其包括以下步骤：

S1：提取待测样品RNA；

S2：反应体系配制：25μL反应体系包含待测样品RNA 2μL、10×Thermopol ReactionBuffer 2.5μl、100mM MgSO₄ 1.5μl、5 mM betaine 4μl、10mM dNTP 3.5μl，Bst DNApolymerase 1μl，WarmStart RTx reverse transcriptase 0.5μl，引物加入量为：100µMFIP/BIP引物各0.8μl，100µM F3/B3所示引物各0.1μl，ddH₂O补至25μl；

S3：将反应体系置64℃-65℃条件下恒温扩增反应45-60min，获得反应液；

S4：结果分析：使用钙黄绿素颜色指示剂或浊度仪对所述反应液进行检测分析。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S3中将反应体系置64℃条件下恒温扩增反应50min。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤S4中所述结果分析的方法为：当使用钙黄绿素颜色指示剂进行检测时，向所述反应液中添加1µl的钙黄绿素颜色指示剂，呈现绿色表示待测样品中存在黄热病毒，呈现橙色表示待测样品中不存在黄热病毒；

当使用浊度仪进行检测时，所述反应液的浊度相对于扩增反应之前的反应体系的浊度上升表示待测样品中存在黄热病毒，浊度无变化表示待测样品中不存在黄热病毒。