[发明专利]RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物

权利要求书

1.用于非诊断目的RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤（1），cDNA第一链的合成：

分别以健康和待测树鼩新鲜组织提取的总RNA为模板，逆转录合成得树鼩肾脏组织cDNA第一链；所述的新鲜组织为新鲜肾脏、肝脏、小肠组织；

步骤（2），健康树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增：

以Easy dilution梯度稀释步骤（1）得到的健康树鼩组织cDNA第一链，分别以未稀释cDNA第一链及稀释后的cDNA为模板，进行实时荧光定量检测，并分别以SLC22A8 F和SLC22A8 R、GAPDH F和GAPDH R为特异性引物，进行实时荧光定量PCR扩增，分别得到健康树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的溶解曲线和扩增曲线；

步骤（3），标准曲线的建立：

以起始模板量拷贝数Log₁₀的对数值为X轴，以Ct值为Y轴进行绘制，分别得到GAPDH基因、SLC22A8基因的标准曲线；

步骤（4），待测树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增：

将步骤（1）得到的待测树鼩组织cDNA第一链分别以SLC22A8 F和SLC22A8 R、GAPDH F和GAPDH R为特异性引物，进行实时荧光定量PCR扩增，扩增体系和扩增程序与步骤（2）相同，分别得到待测树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的溶解曲线和扩增曲线；

步骤（5），树鼩SLC22A8基因转录水平的定量：

根据步骤（2）得到的标准曲线进行计算，得到树鼩SLC22A8基因转录水平；

所述的SLC22A8 F、SLC22A8 R、GAPDH F、GAPDH R引物的序列如下：

SLC22A8 F：5＇-cagtcatccggcaaagaggt-3＇；

SLC22A8 R：5＇-caggaagggcttcacctcag-3＇；

GAPDH F：5＇-agccccatcaccatcttcc-3＇；

GAPDH R：5＇-aatgagccccagccttctc-3＇。

2.根据权利要求1所述的用于非诊断目的RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法，其特征在于，以Easy dilution梯度稀释步骤（1）树鼩组织cDNA第一链，梯度稀释倍数分别为5倍、25倍、125倍、625倍。

3.根据权利要求1所述的用于非诊断目的RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法，其特征在于，实时荧光定量PCR扩增体系下：SYBR Premix Ex Taq II (2x) 5μL，上、下游引物各0.4μL，cDNA模板0.8μL，去离子水3.4μL，总计10μL，上、下游引物浓度均为10μM；

实时荧光定量PCR扩增程序为：95℃预变性30s，95℃变性10s、60℃退火30s、40个循环。