[发明专利]RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物

说明书

本发明涉及一种RT‑qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物，属于分子生物技术领域。该方法包括cDNA第一链的合成、健康树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增、标准曲线的建立、待测树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增、树鼩SLC22A8基因转录水平的定量五大步骤。本发明操作简单，可重复性高，特异性强，灵敏度好，能够对树鼩SLC22A8基因转录水平进行定量检测，易于推广应用。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，具体涉及一种RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物。

背景技术

SLC22A8基因在基因库中的代码为SLC22A8基因，属SLC22A(有机阴离子转运蛋白)家族，SLC22A8基因主要在近曲肾小管上皮细胞的基侧膜上表达，在肝脏、肠和大脑亦有分布。其介导有机阴离子进入其分布的细胞，进而参与多种药物在肾脏的分泌、重吸收和在体内的分布等。主要转运体内内源性及外源性有机阴离子，在药物和毒物的排泄中发挥重要作用，尿酸的排泄是主要依靠肾小管中SLC22A8基因表达的一种内源性有机阴离子完成的。SLC22A8基因表达降低，肾脏分泌减少有机阴离子积累，导致肾脏炎症。

高尿酸血症是由于尿酸盐沉积或尿酸代谢障碍所致血清尿酸水平增高所引起的一种代谢性疾病，正常嘌呤饮食状态下，非同日2次空腹血尿酸水平，男性＞420微摩尔/升，女性＞360微摩尔/升，即可判定为高尿酸血症，近年来发病率不断上升。尿酸水平越高、高尿酸持续的时间越长，则发生痛风的可能性就越大。高尿酸血症的危害并不仅限于痛风发作，过高的尿酸水平会加剧动脉粥样硬化，损伤血管，所以很多高尿酸血症患者虽然没有出现痛风，但很可能会出现肾病、冠心病、高血压、肾脏结石等疾病。动物模型作为研究疾病发病机制和药理药效的一种方法在科学发展中有着非常重要的作用。研究显示血尿酸是肾功能异常的独立危险因素，其对肾功能的影响甚至超过尿蛋白。高尿酸血症对全身的健康状况都会带来影响，多项研究发现，高尿酸血症与心血管疾病、肾脏疾病、代谢综合征的发生、发展有密切关联，体内高尿酸水平也可增加癌症患者的病死率。反之，肾脏是体内调控尿酸排泄的重要器官，所以肾损伤又会阻碍尿酸的排泄，使得血尿酸浓度进一步升高，所以高尿酸血症和肾功能损害是相互作用的，在临床上表现为痛风性性肾病、急性高尿酸肾病、尿酸结石等。可见研究血尿酸升高导肾损伤的发病因素对于治疗肾损伤疾病和高尿酸血症都至关重要。同时探讨高尿酸血症的发病机理和建立动物模型对于攻克高尿酸血症尤为重要。

文献报道中对SLC22A8基因的研究主要集中在其结构、功能上，然对SLC22A8基因转录水平的研究也极其重要，目前，采用基因编辑技术敲除SLC22A8基因的研究可以进一步探索SLC22A8基因的作用机制，故建立一种可靠的，高效的基因转录水平检测方法就很有必要。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物。本发明引物灵敏度高，产物单一，对树鼩肝脏、肾脏、小肠都能高效的定量检测SLC22A8基因转录水平，为SLC22A8基因和其表达产物SLC22A8基因的进一步研究打下基础。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

用于非诊断目的RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法，包括如下步骤：

步骤（1），cDNA第一链的合成：

分别以健康和待测树鼩新鲜组织提取的总RNA为模板，逆转录合成得树鼩肾脏组织cDNA第一链；所述的新鲜组织为新鲜肾脏、肝脏、小肠组织；

步骤（2），健康树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增：