[发明专利]一种常温机械器官灌注液及其用途

权利要求书

1.离体器官灌注液在制备药物中的用途，所述药物用于保存移植用离体器官，其中，基于每1000mL的总体积，所述离体器官灌注液由以下物质组成：

基于每10g的高分子聚合血红蛋白，所述离体器官灌注液包括：

高分子聚合血红蛋白 10g，

葡萄糖 2.5g-4g，

肝素钠 7500u-10000u，

氯化钠 2g-3g，

头孢西丁钠 0.5g-0.75g，

碳酸氢钠 0.37g-0.5g，

10％复方氨基酸注射液 15mL-20mL，

注射用12种复合维生素 0.05mL-0.08mL，

胰岛素 50u-80u，和

余量水；

其中，所述高分子聚合血红蛋白中分子量为320kD-1024kD的聚合血红蛋白含量≥95％，且所述高分子聚合血红蛋白是通过如下方法获得的：

采集新鲜血液1L，用0.5-1倍于血液体积的6g/L的柠檬酸钠溶液进行稀释；

用60μm的深层过滤器过滤所述稀释后的所述血液，并用6g/L的柠檬酸钠溶液冲洗60μm的深层过滤器上的残留物直至通过所述过滤器的血红蛋白达到95％以上；

将上述通过60μm的深层过滤器的物质置于0.65μm中空纤维膜上，使用5-8倍于初始血液体积的6g/L的柠檬酸钠溶液冲洗0.65μm中空纤维膜上的物质使得小于0.65μm的物质通过0.65μm中空纤维膜；

向被0.65μm中空纤维膜截留的物质按1:1-2于初始血液体积加入注射水以裂解红细胞，用100KD滤膜超滤裂解的红细胞，透过端为所需的血红蛋白，同时依据透过速率加入注射用水以保持恒定的超滤体积，直至血红蛋白的收率≥95％，停止100KD超滤；

用30KD膜包浓缩前述经100KD滤膜纯化的血红蛋白至其浓度为血红蛋白浓度10-14g/dL；

将上述浓度为10-14g/dL的纯化的血红蛋白经阴离子层析纯化以得到精纯的血红蛋白；

将上述获得的精纯的血红蛋白置于30KD滤膜上，用3倍于精纯的血红蛋白体积的50mM磷酸氢二钠缓冲换液；

然后通入惰性气体脱氧至氧合血红蛋白小于5％，按1g血红蛋白35-45mg戊二醛的比例以雾化的方法加入戊二醛，接着按1g的血红蛋白13-18mg的硼氢化钠终止聚合反应；

接着将获得的聚合血红蛋白浓缩至6-7g/dL，将浓缩至6-7g/dL的聚合血红蛋白置于300KD的超滤膜包上，使用5-10倍于6-7g/dL的聚合血红蛋白的体积的乳酸林格氏液换液得到聚合血红蛋白，在换液过程中分子量320-1024kD的聚合血红蛋白含量达到≥95％指标时，收集蛋白溶液，通入惰性气体进行脱氧至氧合血红蛋白含量≤5％，0.2μm过滤除菌，获得所述高分子聚合血红蛋白。

2.权利要求1所述的用途，其中，所述阴离子层析纯化是通过如下步骤进行的：

20mM tris的溶液平衡柱子；之后40min上完样品；之后3倍于浓度为10-14g/dL的纯化的血红蛋白体积的29Mmtris溶液洗杂；之后4-5倍于浓度为10-14g/dL的纯化的血红蛋白体积的50mM tris溶液洗脱。

3.权利要求1所述的用途，其中，所述乳酸林格氏液的组成为：氯化钠6.73g/L、氯化钾0.3g/L、二水氯化钙0.2g/L、40％乳酸钠3.07g/L、N-乙酰-L-半胱氨酸22g/L。

4.权利要求1所述的用途，基于每1000mL的总体积，所述离体器官灌注液由以下物质组成：

高分子聚合血红蛋白 30g，

葡萄糖 9g，

肝素钠 25000u，

氯化钠 7g，

头孢西丁钠 2g，

碳酸氢钠 1.25g，

10％复方氨基酸注射液 50mL，

注射用12种复合维生素 0.2mL，

胰岛素 180u，和

余量水。