[发明专利]一种高氮素利用转基因大豆8c-ox-2外源插入片段的侧翼序列、获取方法和应用

权利要求书

1.一种高氮素利用转基因大豆8c-ox-2外源插入片段的侧翼序列，其特征在于，所述侧翼序列的核苷酸序列如SEQ ID No.1～2所示。

2.权利要求1所述的侧翼序列的获取方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取转基因大豆8c-ox-2的基因组DNA，对所述基因组DNA进行基因组重测序，根据重测序结果确定转基因大豆8c-ox-2的T-DNA序列插入到大豆基因组第15号染色体上2779776～2781294碱基之间；

2)提取转基因大豆8c-ox-2的基因组DNA，以所述基因组DNA为模板进行PCR扩增，得到扩增产物；

3)将所述步骤2)得到的扩增产物进行测序，将得到的测序结果同phytozome数据库中大豆基因组序列和步骤1)得到的T-DNA序列进行序列比对，得到侧翼序列。

3.根据权利要求2所述的获取方法，其特征在于，所述PCR扩增使用的引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3～6所示，所述SEQ ID No.3～4为扩增SEQ ID No.1的引物，所述SEQ IDNo.5～6为扩增SEQ ID No.2的引物。

4.根据权利要求2所述的获取方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为94℃5min；94℃30s，58℃30s，72℃30s，35个循环；72℃10min。

5.根据权利要求2或4所述的获取方法，其特征在于，所述PCR扩增使用的体系每25μl包括基因组DNA100 ng，10×buffer 2.5μl，2.5mM dNTPs2μl，10μM引物各1μl，5U/μl Taq酶0.2μl，ddH₂O补至25μl。

6.权利要求3中所述的引物在检测转基因大豆中的应用。