[发明专利]一种高氮素利用转基因大豆8c-ox-2外源插入片段的侧翼序列、获取方法和应用

说明书

提供了一种高氮素利用转基因大豆8c‑ox‑2外源插入片段的侧翼序列及其应用，属于基因育种技术领域。本发明提供的氮高效转基因大豆事件8c‑ox‑2经鉴定插入位点侧翼序列的核苷酸序列如SEQ ID No.1～2所示。本发明提供用于检测该旁支序列的引物，如SEQ ID No.3～6所示。本发明提供的侧翼序列及其鉴定适用于氮高效转基因大豆8c‑ox‑2(包括亲本、杂种F1和后代)及其制品(包括植株、组织、种子及其制品)的检测。

技术领域

本发明属于基因育种技术领域，尤其涉及一种高氮素利用转基因大豆 8c-ox-2外源插入片段的侧翼序列、获取方法和应用。

背景技术

转基因育种具有性状改良精准、周期短等特点。利用转基因技术进行作物氮素利用效率改良可以改善氮肥过度施用的现状，提高农业的可持续发展能力。细胞自噬是营养物质再动员的主要形式。在拟南芥中证明很多自噬相关基因ATGs的突变都会导致植物早衰，表现出对氮/碳胁迫更为敏感的表型 ((Doelling等，2002；Hanaoka等，2002；Yoshimoto等，2004；Thompson 等，2005；Xiong等，2005；Chung等，2010)。GmATG8c蛋白是细胞自噬关键蛋白，在自噬体的形成和延展过程中发挥重要的功能(Xia T,Xiao D, Liu D,Chai W,GongQ,et al.Heterologous expression ofATG8c from soybean confers tolerance tonitrogen deficiency and increases yield inArabidopsis.PLoS ONE,2012,7:e37217.doi:10.1371)。

将含有携带大豆自噬关键基因表达盒35S:GmATG8c的植物表达载体通过农杆菌介导法转入到大豆基因组中，获得了一个氮高效转基因大豆事件 8c-ox-2(徐伟,刘生,游翔,梅圆圆,王丹,王宁宁.过表达GmATG8c基因提高大豆的低氮耐受性和产量.植物生理学报，2017，2(1)，241-247)，并正在进行中间试验阶段的安全评价。对转基因大豆进行转化事件特异性检测，能更好的对转基因大豆进行监管管理，而外源插入片段的侧翼序列，是进行监督管理的一个重要指标。因此需要获得转基因大豆8c-ox-2的侧翼序列，但是现有技术中并未报道有转基因大豆8c-ox-2的侧翼序列。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种高氮素利用转基因大豆8c-ox-2 外源插入片段的侧翼序列、获取方法和应用，本发明提供的侧翼序列可应用于转基因大豆的检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种高氮素利用转基因大豆8c-ox-2外源插入片段的侧翼序列，所述侧翼序列的核苷酸序列如SEQ ID No.1～2所示。

本发明还提供了上述技术方案所述的侧翼序列的获取方法，包括以下步骤：

1)提取转基因大豆8c-ox-2的基因组DNA，对所述基因组DNA进行基因组重测序，根据重测序结果确定转基因大豆8c-ox-2的T-DNA序列插入到大豆基因组第15号染色体上2779776～2781294碱基之间；

2)提取转基因大豆8c-ox-2的基因组DNA，以所述基因组DNA为模板进行PCR扩增，得到扩增产物；

3)将所述步骤2)得到的扩增产物进行测序，将得到的测序结果同 phytozome数据库中大豆基因组序列和步骤1)得到的T-DNA序列进行序列比对，得到侧翼序列。

优选的，所述PCR扩增使用的引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3～6所示，所述SEQID No.3～4为扩增SEQ ID No.1的引物，所述SEQ ID No.5～6 为扩增SEQ ID No.2的引物。