[发明专利]新型小动物体内微量细胞活体成像标记方法

权利要求书

1.一种活体成像动物模型的培育方法，其特征在于，包括：

将特异启动子-CreER序列和启动子-loxP-STOP-loxP-荧光素酶序列敲入同一动物的基因组，得到活体成像动物模型；

所述特异启动子-CreER是带有组织特异性启动子的CreER基因；所述启动子-loxP-STOP-loxP-荧光素酶序列是依次带有启动子、loxP序列、终止子序列、loxP序列和荧光素酶基因的DNA序列。

2.如权利要求1所述的培育方法，其特征在于，它还包括：

使所述活体成像动物模型的基因组携带启动子-loxP-STOP-loxP-荧光标记基因序列；

所述启动子-loxP-STOP-loxP-荧光标记基因序列是依次带有启动子、loxP序列、终止子序列、loxP序列和表达荧光蛋白的基因的DNA序列；

所述启动子-loxP-STOP-loxP-荧光标记基因序列与启动子-loxP-STOP-loxP-荧光素酶序列位于同源染色体的相同位置；

所述启动子-loxP-STOP-loxP-荧光标记基因序列与启动子-loxP-STOP-loxP-荧光素酶序列的启动子序列一致。

3.如权利要求2所述的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将特异启动子-CreER序列敲入动物A和/或B的基因组；

2)将启动子-loxP-STOP-loxP-荧光素酶序列敲入动物A的基因组；

3)将启动子-loxP-STOP-loxP-荧光标记基因序列敲入动物B的基因组；

4)使动物A和动物B交配，得到同时带有特异启动子-CreER序列、荧光素酶基因和荧光蛋白基因的后代动物C；

所述后代动物C即为要培育的活体成像动物模型。

4.如权利要求1～3任一所述的培育方法，其特征在于：

所述荧光素酶基因是Akaluc基因。

5.如权利要求1～3所述的培育方法，其特征在于：

所述荧光标记基因表达BFP、GFP、YFP、RFP、mCherry或tdTomato荧光蛋白；优选地，表达tdTomato荧光蛋白。

6.如权利要求1～3所述的培育方法，其特征在于：

所述组织特异性启动子为是神经干细胞特异表达蛋白Nestin的启动子；

和/或，启动子-loxP-STOP-loxP-荧光素酶序列中的启动子是CAG启动子。

7.如权利要求2或3所述的培育方法，其特征在于：所述同源染色体的相同位置为ROSA26基因位点。

8.如权利要求1～3任一所述的培育方法，其特征在于：所述动物是斑马鱼、线虫、大鼠或小鼠，优选为小鼠。

9.一种动物活体成像方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)在权利要求1～8任一所述方法培育的动物模型中注射他莫昔芬10mg/kg；

2)在注射他莫昔芬后第1～14天注射所述荧光素酶的底物，观察荧光。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：所述荧光素酶为Akaluc时，步骤2)中底物为Akalumine，注射剂量是每次0.2～75nmol/g，优选剂量为1nmol/g。

11.如权利要求9或10所述的活体成像方法，其特征在于，它还包括对动物进行免疫荧光染色验证。