[发明专利]一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，包括：

包被有金纳米颗粒的免疫磁珠探针、金纳米粒子探针、刻蚀溶液和标准菌液；

所述的一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒的制备方法，包括：

步骤一：包被有金纳米颗粒的磁珠的制备

将FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O溶于去离子水中，剧烈搅拌，逐滴加入NaOH，充分搅拌，使溶液pH值为12；使用永磁铁分离混合物中的黑色固体物质，进行清洗，将固体产物于37℃环境中放置，然后冲洗干燥，得到黑色固体产物；

将上述黑色固体产物溶于去离子水中，超声至分散均匀，加入EDTA-NaOH溶液和CTAB溶液，混合均匀，再加入氯金酸溶液和NaOH溶液，混合均匀，最后加入盐酸羟胺后搅拌至溶液均匀无沉淀；将混合物室温条件下放置，获得包被有金纳米颗粒的磁珠；

步骤二：免疫磁珠探针的制备

取包被有金纳米颗粒的磁珠，加入EDC和NHS活化羧基，磁分离去上清，PBS清洗，加入金黄色葡萄球菌特异性鸡卵黄抗体IgY反应，磁分离去上清，PBS清洗，重悬于PBS中，得到免疫磁珠探针；

步骤三：金纳米粒子探针的制备

称取柠檬酸三钠和柠檬酸，溶于去离子水，制备柠檬酸混合液，取氯金酸溶于去离子水中，得到氯金酸溶液，搅拌加热至剧烈沸腾；然后加入柠檬酸混合液，继续加热搅拌至溶液呈酒红色；移除热源冷却至室温，得到金纳米粒子；

取金黄色葡萄球菌特异性适配体，95℃加热5分钟，4℃冷却5分钟；加入上述金纳米粒子，室温反应过夜，得到金纳米粒子探针；

步骤四：刻蚀溶液和标准菌液的制备。

2.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述步骤一的FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O的摩尔浓度比为2：1。

3.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述步骤一的氯金酸溶液的浓度为1mM，所述的NaOH溶液的浓度为0.1M，所述的盐酸羟胺的浓度为0.01M。

4.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述步骤一的包被有金纳米颗粒的磁珠的尺寸为20.37±0.58nm。

5.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述步骤二的包被有金纳米颗粒的磁珠、EDC、NHS和金黄色葡萄球菌特异性鸡卵黄抗体IgY的质量比为20:100:50:1。

6.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述的步骤二的反应温度为室温，反应时间为2h。

7.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述步骤三的氯金酸溶液和柠檬酸混合液的体积比为1:4。

8.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述步骤三的金黄色葡萄球菌特异性适配体的浓度为10μM。

9.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述步骤三的金黄色葡萄球菌特异性适配体和金纳米粒子的摩尔比为45500:1。