[发明专利]一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒及其制备方法，属于试剂盒领域。该试剂盒包被有金纳米颗粒的免疫磁珠探针、金纳米粒子探针、刻蚀溶液和标准菌液。所述的包被有金纳米颗粒的免疫磁珠探针是先制备包被有金纳米颗粒的磁珠，将磁珠与金黄色葡萄球菌特异性鸡卵黄抗体IgY偶联得到免疫磁珠探针；所述的金纳米粒子探针是先合成金纳米粒子，将其与金黄色葡萄球菌特异性适配体偶联得到的；利用本发明制备的试剂盒进行金黄色葡萄球菌检测具有特异性强、灵敏度高、检测时间短的优势，最低检测浓度低至10cfu/mL，可用于食品中金黄色葡萄球菌的检测。

技术领域

本发明属于试剂盒领域，具体提供一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，金葡菌)是一种重要的食源性致病菌，可以通过各种途径污染食品，引发中毒等多种食源性疾病，主要的急性症状有恶心，呕吐，严重可导致死亡。因此，开发一种简单，灵敏，特异的金黄色葡萄球菌检测方法具有重要意义。目前我国对于金葡菌的检测方法以传统的微生物培养、生化鉴定等为主，这些方法操作繁琐、耗时长，难以满足快速检测的要求。

近年来，为了加快检测速度，提高检测结果的准确率，研究者们开发了许多替代方法，如聚合酶链式反应(PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)、酶联免疫吸附法(ELISA)等，但是这些方法具有成本高、仪器设备复杂或灵敏度较低的缺点，限制了其广泛应用，也不利于样品的现场检测。所以，非常必要有开发一种快，灵敏度高，特异性强的检测手段，来监控食源性致病菌，以保障人们的食品安全。

发明内容

本发明目的是提供一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒能快速、灵敏、简便的检测金黄色葡萄球菌。

本发明首先提供一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒，包括：

包被有金纳米颗粒的免疫磁珠探针、金纳米粒子探针、刻蚀溶液和标准菌液。

本发明还提供一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒的制备方法，包括：

步骤一：包被有金纳米颗粒的磁珠的制备

将FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O溶于去离子水中，剧烈搅拌，逐滴加入NaOH，充分搅拌，使溶液pH值为12；使用永磁铁分离混合物中的黑色固体物质，进行清洗，将固体产物于37℃环境中放置，然后冲洗干燥，得到黑色固体产物；

将上述黑色固体产物溶于去离子水中，超声至分散均匀，加入EDTA-NaOH溶液和CTAB溶液，混合均匀，再加入氯金酸溶液和NaOH溶液，混合均匀，最后加入盐酸羟胺后搅拌至溶液均匀无沉淀；将混合物室温条件下放置，获得包被有金纳米颗粒的磁珠；

步骤二：免疫磁珠探针的制备

取包被有金纳米颗粒的磁珠，加入EDC和NHS活化羧基，磁分离去上清，PBS清洗，加入金黄色葡萄球菌特异性鸡卵黄抗体IgY反应，磁分离去上清，PBS清洗，重悬于PBS中，得到免疫磁珠探针；

步骤三：金纳米粒子探针的制备

称取柠檬酸三钠和柠檬酸，溶于去离子水，制备柠檬酸混合液，取氯金酸溶于去离子水中，得到氯金酸溶液，搅拌加热至剧烈沸腾；然后加入柠檬酸混合液，继续加热搅拌至溶液呈酒红色；移除热源冷却至室温，得到金纳米粒子；

取金黄色葡萄球菌特异性适配体，95℃加热5分钟，4℃冷却5分钟；加入上述金纳米粒子，室温反应过夜，得到金纳米粒子探针；

步骤四：刻蚀溶液和标准菌液的制备

优选的是，所述步骤一的FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O的摩尔浓度比为2：1。