[发明专利]化合物proximicin及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了化合物proximicin及其制备方法和应用。本发明构建了重组菌株Verrucosispora sp.SCSIO 40062/pIB139，通过过量表达PPtase的方法增强了野生菌Verrucosispora sp.SCSIO 40062中的proximicin基因簇的表达，并从重组菌株的AM6‑4和AM6培养基发酵粗提物中分离得到了新的proximicin类化合物proximicin F(1)，diproximicin A(2)和proximicin G(3)。

技术领域：

本发明属于工业微生物领域，具体涉及新化合物proximicin F(1)，diproximicinA(2)和proximicin G(3)及其制备方法和应用。

背景技术：

Proximicins是一类氨基呋喃类化合物，已报导的有proximicinsA-E，具有良好的抗肿瘤和抗结核活性。过表达PPtase是一种新的沉默次级代谢基因簇激活方法，本研究拟通过在野生菌Verrucosispora sp.SCSIO 40062中过表达PPtase来激活沉默基因簇，获得新的proximicin类化合物。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供3个新的氨基呋喃类化合物proximicin F(1)，diproximicin A(2)和proximicin G(3)，其结构如式(I)所示：

本发明的第二个目的是提供一种重组菌株Verrucosispora sp.SCSIO 40062/pIB139，其保藏编号为：GDMCC No.60976。

本发明的第三个目的是提供一种上述化合物proximicin F，diproximicin A和proximicin G的制备方法，化合物proximicin F和diproximicin A是从所述的重组菌株Verrucosispora sp.SCSIO 40062/pIB139的AM6-4培养基发酵培养物中分离得到的；而化合物proximicin G是从所述的重组菌株Verrucosispora sp.SCSIO 40062/pIB139的AM6培养基发酵培养物中分离得到的。

优选，具体步骤为：将重组菌株Verrucosispora sp.SCSIO 40062/pIB139分别用AM6-4和AM6培养基发酵培养，获得发酵培养物，离心分离分别收集发酵液和菌丝体，发酵液用大孔树脂XAD-16吸附，然后用丙酮洗脱；菌丝体用甲醇浸提并超声破碎细胞，两者回收有机溶剂后剩余的水相用乙酸乙酯萃取，减压浓缩至干，分别得到重组菌株Verrucosisporasp.SCSIO 40062/pIB139的AM6-4培养基粗提物EX1和AM6培养基粗提物EX2；将粗提物EX1经正相硅胶柱层析分离，用氯仿/甲醇作为洗脱剂从氯仿、氯仿/甲醇4:1、氯仿/甲醇2:1、甲醇，v/v进行梯度洗脱，依次得到流份Fr1-Fr4，将氯仿/甲醇2:1，v/v洗脱的流份Fr3用凝胶柱层析，以氯仿/甲醇1:1，v/v为洗脱剂进行分离，洗脱流份经纯化得到化合物proximicinF和diproximicin A；将粗提物EX2经正相硅胶柱层析分离，用氯仿/甲醇作为洗脱剂从氯仿、氯仿/甲醇4:1、氯仿/甲醇2:1、甲醇，v/v进行梯度洗脱，依次得到流份Fr1-Fr4，将氯仿/甲醇4:1，v/v洗脱的流份Fr2和氯仿/甲醇2:1，v/v洗脱的流份Fr3合并后用凝胶柱层析进行分离，洗脱流份经纯化得到化合物proximicin G。

优选，重组菌株Verrucosispora sp.SCSIO 40062/pIB139的发酵培养方法为：将活化的重组菌株Verrucosispora sp.SCSIO 40062/pIB139接入放线菌一号培养基中，28℃，200rpm培养4d后得到种子液；将种子液以10％，v/v的接种量分别接入AM6-4和AM6发酵培养基中，28℃，200rpm培养5-7d后得到发酵培养物；